非编码rna主题的论文

在近十余年的生命科学研究中非编码调控RNA可谓是研究最火的领域之一，从06年诺奖的siRNA，到这几年异常火爆的microRNA，到即将登场并定能风靡的lncRNA，可谓如火如荼。RNA不仅仅只承担遗传信息中间载体的辅助性角色，而是更多地承担了各种调控功能。ncRNA在发育和基因表达中发挥的复杂精确的调控功能极大地解释了基因组复杂性之难题，同时也为人们从基因表达调控网络的维度来认识生命体的复杂性开启新的天地．现在大部分研究集中于短 RNA如 microRNA，piRNA等一些 ncRNA 生物生成机制和调控通路，甚至在一些人类复杂疾病中的功能，但是这都只是冰山一角。人们对lncRNA(Long noncoding RNAs, LncRNAs) 的认识还处在初级阶段，lncRNA起初被认为是基因组转录的“噪音”，是RNA聚合酶II转录的副产物，不具有生物学功能。然而，近年来的研究表明，lncRNA参与了X染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录激活，转录干扰，核内运输等多种重要的调控过程，lncRNA的这些调控作用也开始引起人们广泛的关注。哺乳动物基因组序列中4%~9%的序列产生的转录本是lncRNA（相应的蛋白编码RNA的比例是1%），虽然近年来关于lncRNA的研究进展迅猛，但是绝大部分的lncRNA的功能仍然是不清楚的，随着研究的推进，各类 lncRNA 的大量发现，lncRNA 的研究将是 RNA 基因组研究非常吸引人的一个方向，使人们逐渐认识到基因组存在人类知之甚少的“暗物质”。

基因表达紊乱是癌症的一个主要标志。事实上，转录因子活动的改变已被证明是一些癌症最常见亚型的驱动因素。RNA对基因表达至关重要，无论是以蛋白编码RNA（mRNAs）的形式，还是以参与和调节转录的非编码RNA形式（lncRNAs或snRNA）、剪接（snRNAs）和翻译（核糖体RNAs、tRNAs和microRNAs）。最近的证据表明，RNA的加工在癌症中被系统改变，证明RNA对肿瘤发生、生长和进展的重要影响。 2020年10月，来自澳大利亚的研究人员在《 Nature Reviews Cancer 》发表题为“RNA in cancer”的综述，讨论了编码和非编码RNA的加工或活性改变如何促进肿瘤的发生、生长和进展，强调了RNA在癌症中的既定角色（miRNA和lncRNA）和新兴角色（选择性mRNA加工和circRNA）以及它们对癌症的作用机制。一旦RNA聚合酶II合成了 mRNA ，它必须首先剪接并进一步加工成成熟的转录物，然后从细胞核输出到细胞质，转化为蛋白质。这些相互连接的处理步骤是由许多大分子复合物完成的，例如剪接体和转录-输出复合物TREX和TREX2。在生理条件下，基因表达也可以通过一些非编码RNA ，包括miRNAs、lncRNAs和circRNAs来调节。通常，miRNAs通过加速靶基因的去乙酰化和降解来负调控基因的表达，而lncRNAs则通过作为调节蛋白复合物的支架、定位到基因组DNA或改变基因组结构来调节顺式或反式的基因表达。许多miRNAs被发现与癌症相关，要么作为肿瘤抑制因子，要么作为癌基因。 miRNA的作用：人类细胞中大多数蛋白质的表达水平受到一个或多个miRNA的某种程度的调控。单个miRNA可以具有许多mRNA靶标，而单个mRNA可以被多个miRNA靶向。尽管miRNA可以共同作用，以抑制在3'非翻译区（UTR）中具有多个miRNA结合位点的靶标的表达，仅一种类型的miRNA与靶标mRNA的结合导致相对温和减少靶基因表达。通过RNA测序已经检测到1000多种不同的miRNA。一些miRNAs，如肿瘤抑制因子let-7，在几乎每种细胞类型中都有大量表达，而另一些miRNAs具有高度的细胞类型特异性表达，或者在某些细胞类型中以非常低的水平存在或不存在。因此在检测低表达的miRNAs的可能影响时，需要谨慎。致癌和抑癌的miRNA： 1. 靶向致癌途径负调控因子的miRNAs在失调时可能通过多个靶点抑制RAS-MEK-ERK信号和miR-155/miR-221，它们分别针对SHIP1（也称为INPP5D）和PTEN，这两个都是AKT信号的负调节器。 2. 在癌症中最常见减少的miRNA是let-7 miRNA突变体，它通过靶向强效癌基因，包括MYC、KRAS和HMGA2作为主要的肿瘤抑制因子。因此，let-7 miRNAs被认为是一个重要的治疗靶标。 3. 大量miRNAs也被报道通过限制或逆转上皮-间质转化（EMT）来限制转移和/或化疗耐药，其中最有效的是miR-200家族。 miRNA失调的机制： miRNA基因由RNA聚合酶II转录，因此受到与蛋白质编码基因相同类型的表观遗传调控。事实上，许多miRNA基因都来自于蛋白质编码基因的内含子。在癌症中有许多关于miRNAs表观遗传失调的报道。癌症中miRNA表达水平广泛下调的一种模式是源于缺氧诱导的癌细胞中Drosha和Dicer表达水平的降低，以及AGO2的磷酸化，进而降低了Dicer与AGO2并抑制miRNA从前体到成熟miRNA的加工。然而，并不是所有的miRNAs都会受到缺氧的下调，例如，miR-210的转录诱导可以覆盖缺氧诱导的加工减少，并且可以抑制免疫缺陷小鼠肿瘤生长的启动，但也可以促进细胞在肿瘤缺氧的应激环境中的适应和生存。 miRNAs下调的另一个机制可能是由于基因突变或前miRNAs转运蛋白exportin 5（XPO5）磷酸化水平的变化而减少核的输出。 lncRNAs已经被发现具有致癌或肿瘤抑制功能。 lncRNAs的作用： lncRNAs是指长度超过200个核苷酸不编码蛋白质的RNA。与mRNAs一样，它们由RNA聚合酶II转录，但与mRNAs不同，许多lncRNAs优先定位于细胞核。它们具有不同的功能，包括核作用，如调节顺式或反式中的基因表达，调节剪接以及亚单位透明结构域的成核。2010年，lncRNA HOTAIR通过参与染色质重塑促进乳腺癌转移，随后发现许多lncRNA具有影响癌症发展或进展的功能。一些lncRNAs可能具有多种看似不相关的功能。例如，lincRNA-p21最初被鉴定为p53诱导的肿瘤抑制因子lncRNA80，并被证明介导异质性核糖核蛋白K（HNRNPK）与其邻近基因CDKN1A（编码p21）的结合并增加其转录。致癌和抑癌的lncRNA： 1. 最近的一项研究揭示了lncRNA-REG1CP在结直肠癌中的表达经常上调。REG1CP通过将解旋酶FANJ与相邻基因REG3A86的启动子连接，促进结直肠癌异种移植瘤的生长。 2. PCAT19是一种致癌的lncRNA，它激活反式基因，促进前列腺癌的生长、侵袭和转移。 3. 细胞质lncRNAs也可能是癌基因。在MYCN扩增的神经母细胞瘤中过度表达的lncRNA linc0255，通过与核糖体蛋白RPL35的相互作用特别激活E2F1的翻译。 4. lncRNAs也可以作为肿瘤抑制剂。核lncRNA DIRC3影响局部染色质结构，激活编码肿瘤抑制因子IGFBP5的邻近基因的转录。 5. lncRNAs也可以通过调节细胞质中的信号来抑制肿瘤。细胞质lncRNA-DRAIC在去势抵抗的晚期前列腺癌中下调，并通过干扰NF-κB激酶（IKK）活性抑制剂抑制核因子-κB（NF-κB）激活来抑制其进展。 6. 一些lncRNAs仍然有可能编码小蛋白。事实上，lncRNA LINC00908可以产生一种60个氨基酸的多肽，与正常组织样本相比，该多肽在三阴性乳腺癌组织中下调，并且与整体生存率差有关。 lncRNAs的多重对立效应：关于lncRNA基因在癌症中的影响，最能说明问题的一个例子是考虑lncRNA基因在强效癌基因表达中的作用，也可能反映了MYC在驱动对增殖和生长信号的转录反应中所起的关键作用，MYC基因的转录受多个邻近lncRNA基因转录的调控。这也凸显了lncRNA基因座可以产生具有不同甚至相反功能的RNA。通过对小鼠体内大量MALAT1 lncRNA进行基因缺失研究的对比解释，进一步强调了lncRNA对基因表达影响的复杂性。circRNA的新角色： circRNAs基本上在所有细胞和组织中都有表达，并且在癌症中可能被错误调节。circRNA主要是反向剪接事件的产物，它将外显子拼接到前一个外显子而不是下游外显子上，从而形成共价闭合的circRNA分子。有报道称，一些circRNA位于细胞核内并调节转录，但大多数circRNAs位于细胞质中。单个细胞可以表达数千个circRNAs，通过对患者肿瘤和癌细胞系RNA的深度测序，总共检测到超过200000个不同的circRNAs。一些circRNAs被发现在癌症中与相应的正常组织相比过度表达，增加了它们作为疾病生物标志物的可能性。 circRNAs有可能作为癌基因或肿瘤抑制因子发挥作用，可能是通过充当miRNAs的海绵，而一项敲除筛选表明，前列腺癌细胞中一些高度丰富的circRNAs对细胞的最大增殖至关重要，虽然还需要更多的工作来确定致癌或肿瘤抑制circRNAs。 circRNA可能还充当多蛋白复合物的核因子或组分。失调的circRNAs：什么导致癌症中的细胞周期失调？基因拷贝数或circRNA前体转录的改变无疑改变了它们在某些癌症中的水平。然而，由于大多数circRNAs是来自蛋白质编码基因的选择性剪接产物，因此需要仔细区分这些变化的影响与同源蛋白水平变化的影响。circRNA水平变化的另一种方式是通过参与circRNA生物合成的剪接因子水平的改变。mRNA前体的剪接以去除内含子并以不同的方式连接外显子是基因表达的基础。事实上，选择性剪接可以通过产生选择性蛋白质亚型来促进转录组和蛋白质组的多样性。这个过程是由主要的剪接体完成的，它执行大多数的RNA剪接反应，并且与300多种不同的蛋白质相关。一旦mRNAs被剪接和多聚腺苷酸化，它们必须从细胞核中的转录和加工部位输出到细胞质中进行翻译。有效的mRNA输出是通过将基因表达途径中的上游过程（即转录、剪接和多聚腺苷酸化）与mRNA输出耦合来实现的。mRNA不断地通过核孔复合体的内部通道运输，使蛋白质和分子能够穿过核膜。转录、RNA剪接和多聚腺苷酸化与mRNA输出之间存在广泛的耦合，对肿瘤的发生具有重要意义。 mRNA剪接的新角色： mRNA剪接在历史上被认为是一个内控过程，对多外显子基因的表达至关重要，但最近的研究结果显示了RNA剪接机制的调控潜力。改变的mRNA剪接机制如何促进肿瘤的发生？SRSF2、SF3B1和U2AF1的突变都不同程度地影响3′剪接位点识别。这种改变的剪接可能会影响编码促进转化的蛋白质转录物的稳定性。选择性裂解和聚腺苷酸化：在肿瘤中也广泛观察到下游mRNA处理步骤的改变，如前体mRNAs的裂解和多聚腺苷酸化。例如，3′UTR区在肿瘤细胞系和肿瘤标本中均发生缩短。选择性mRNA输出的新兴作用：基因表达途径的末端步骤之一，mRNA的核输出，在癌症中也发生了改变。虽然mRNA输出被认为是基因表达中的一个普遍的、默认的途径，但是特定的生物途径可以通过选择性的mRNA输出来调节，使某些mRNAs优先于其他的。选择性mRNA输出可以调节对癌症发展至关重要的生物学过程，如细胞增殖和基因组完整性。这种mRNA输出机制的调节潜力可被癌细胞利用以维持增殖。在过去的几年里，大量的研究已经非常详细地揭示了RNA在癌症中发生系统性改变的程度。癌症中编码和非编码RNA的广泛改变影响了肿瘤发生的多个方面。这些不同的RNA亚型和处理它们的蛋白质参与癌症发生的机制特性，为治疗干预提供机会。例如，一些以核心剪接体机制为靶点的化合物，如与SF3B复合物结合的E7107，在体内影响RNA剪接，但在I期临床试验中静脉注射时表现出显著的毒性。最近的研究表明，在具有剪接体突变的晚期血液恶性肿瘤中，使用SF3B复合物H3B-8800的可口服调节剂，在耐受剂量良好的小鼠模型中显示了优先抗肿瘤活性。其他研究试图通过使用介导其蛋白酶体降解的化合物作为干扰剪接的替代药理学手段来调节选择性和调节性剪接因子，如RBM39，在小鼠急性髓系白血病模型中获得成功。RNA在癌症中的广泛改变将为治疗提供大量的新机会。进一步阐明RNA加工改变促进肿瘤发生、生长和进展的基本机制，对于确保癌症疗法专门针对RNA加工过程且对正常细胞的影响最小至关重要。首发公号：国家基因库大数据平台参考文献 Goodall, ., Wickramasinghe, . RNA in cancer. Nat Rev Cancer (2020). .

暖通空调杂志主编郑远非

江浙地区二级生物安全实验室关键防护设备应用现状调研分析暖通空调杂志03-14写在前面近年来，随着对科技创新的重视和经费的大量投入，实验室建设项目数量激增。然而，相对应的现状是：长期以来，建筑业的发展一直以民用建筑和工业建筑为主，肩负着科技创新重任的实验室建筑的建设与发展未得到应有的重视。实验室建筑作为特殊建筑，其量大面广，通常在民用和工业领域中同时存在，且实验室不同细分行业的技术及市场发展不均衡。及时总结我国科学实验室建设和管理的发展成就、经验以及存在问题，迫在眉睫。中国建设科技集团股份有限公司亚太建设科技信息研究院（原建设部科技信息情报所）《暖通空调》杂志社和同济大学共同发起并立项了实验室建设课题研究，得到了业内顶级专家团队的大力支持，在此表示衷心的感谢。研究成果将陆续通过图书/期刊/微信等多种方式和大家分享，今日主题为：二级生物安全实验室关键防护设备应用现状调研分析，全文将经同行评议后在《暖通空调》杂志刊出，敬请关注。摘要介绍了调研样本的基本信息。从设备品牌、类型、使用效果等方面，详细分析了二级生物安全实验室关键防护设备（包括防护口罩、生物安全柜、压力蒸汽灭菌器、通风空调系统）的应用现状。结果表明，我国二级生物安全实验室关键防护设备基本已实现国产化，使用效果基本满意。在负压二级生物安全实验室中，呼吸道疾病实验室数量占比最高，为34%；其次为特殊实验（包括基因扩增实验室、艾滋病筛查实验室），为31%。关键词二级生物安全实验室防护口罩生物安全柜压力蒸汽灭菌器通风空调系统作者亚太建设科技信息研究院有限公司胡竹萍江苏省疾病预防控制中心谢景欣亚太建设科技信息研究院有限公司张静刘学民刘承军陶柏成同济大学刘东王沈瑜中国合格评定国家认可中心吕京生物安全二级（BSL-2）实验室是涉及致病性生物因子实验活动的常用实验室，适用面最广、使用量最大，其广泛分布在医疗卫生、生物医药、科研院所、教育机构、农牧渔业等行业，加强其建设和管理具有十分重要的意义。1研究背景及调研基本信息为了解二级生物安全实验室关键设备的应用现状，总结应用中存在的问题，笔者针对江苏省和浙江省部分二级生物安全实验室的关键设备进行了问卷调研，问卷内容包括3部分：实验室基本情况、实验室个人防护装备及关键设备设施、实验室投资与成果产出，调研问卷内容涉及实验室名称、操作的病原体、实验室压力；防护口罩、一次性防护服等个人防护装备的品牌、类型及价格；生物安全柜、压力蒸汽灭菌器、通风空调系统等关键设备的品牌、类型、价格、检测、维护、使用效果等。调研表的内容多达280多项，本文仅对实验室基本情况、防护口罩、生物安全柜、压力灭菌器、负压实验室通风空调系统设备5个方面进行分析。本研究共收到211个有效二级生物安全实验室的调研表，在调研样本中，医疗机构实验室数量最多，共126个，分别分布在88家医疗机构，其中5个为负压二级生物安全实验室，121个为常压实验室；疾控机构实验室数量次之，共64个，分别分布在14家疾控机构，其中19个为负压二级生物安全实验室，45个为常压实验室；其他（包括企业实验室、第三方检测机构实验室）数量最少，共21个，其中8个为负压实验室，13个为常压实验室。关于负压实验室数量占该领域全部二级生物安全实验室的比例，其他机构最高（38%），疾控机构次之（30%），医疗机构最少（4%）。调研样本的分布及占比分析分别见表1和图1。表1 二级生物安全实验室调研样本的分布图1 二级生物安全实验室调研样本的占比分析根据调研资料统计，负压二级生物安全实验室的类型、压力及操作的病原体如表2所示。由表2可知，在负压二级生物安全实验室中，呼吸道疾病实验室数量占比最高，为34%；特殊实验（包括基因扩增（PCR）实验室、艾滋病（HIV）筛查实验室）数量占比次之，为31%。表2 负压二级生物安全实验室的类型、压力2关键设备使用现状调研数据分析防护口罩在调研样本中，疾控机构实验室共64个，分布在14家疾控单位；医疗机构实验室共124个，分布在88家医疗单位；其他机构（包括生物医药、医学检验、药业、食品检验检测等行业的10个单位）的实验室共21个。防护口罩调研数据分析如下。1）关于口罩品牌国产化方面，疾控系统中的14家单位均配置防护口罩，除3个单位选用国产品牌，1个单位选用进口品牌A，其他10家单位均选择了进口品牌B的口罩，进口品牌占比为79%，国产品牌占比为21%；医疗机构中的75家选用国产品牌，13家选用进口品牌，进口品牌占比为15%，国产品牌占比为85%；其他机构中，7家选用国产品牌，1家选用进口品牌，2家选用了进口和国产两种品牌，进口品牌占比为10%，国产品牌占比为70%，既有国产品牌又有进口品牌的单位占比为20%。不同机构选用进口与国产口罩占比见图2。2）关于口罩类型方面，疾控机构所有单位均选用N95类型；医疗机构，40家选用N95类型，其余48家选用一次性使用医用口罩、医用外科口罩等。3）使用效果方面，大多为较满意或者基本满意，也有个别单位提出问题：口罩与面部贴合性较差；有闷感；对防护效果有疑问。图2 不同机构选用进口与国产口罩占比生物安全柜1）国产品牌设备使用数量占比方面，疾控机构的调研样本总计64台，其中进口品牌设备40台（占比），国产品牌设备24台（占比）；医疗机构的调研样本总计165台，其中进口品牌设备19台（），国产品牌设备146台（占比）；其他机构的调研样本总计22台，其中进口品牌设备4台（占比），国产品牌设备18台（占比）。疾控机构的国产品牌占比最低，其他机构次之，医疗机构最高。2）生物安全柜类型方面，A2的比例最高，疾控机构和医疗机构的比例分别为和67%，B2次之，疾控机构和医疗机构的比例分别为和25%，A1和B1较少。3）排风形式方面，独立排风形式占比较高，疾控机构和医疗机构的比例分别为81%和87%，合并排风形式占比较少，疾控机构和医疗机构的比例分别为19%和13%。4）使用效果和存在问题方面，使用效果为基本满意，存在问题有以下几个方面：对于进口品牌设备，存在配件不宜获取以及配件价格昂贵方面的问题，还出现了某进口品牌设备玻璃门拉不动的现象；对于某国产品牌设备，出现了台面和侧壁生锈现象；共性的问题有：紫外线灯具易损坏及高效过滤器更换方面的问题。各机构生物安全柜进口与国产品牌数量见图3。图3 各机构生物安全柜进口与国产数量压力蒸汽灭菌器1）总体来看，在调研样本中，13家单位采用了48台进口品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为），64家单位采用了79台国产品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为）。进口品牌的数量占比远低于国产品牌，说明国产品牌技术在该领域已相当成熟，且用户认可度非常高。2）从应用领域来看，在疾控机构中，5家单位采用了33台进口品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为），4家单位采用了22台国产品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为）；在医疗机构中，6家单位采用了12台进口品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为），52家单位采用了41台国产品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为）；在其他机构中，2家单位采用了3台进口品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为），8家单位采用了16台国产品牌的压力蒸汽灭菌器（数量占比为）。疾控机构的国产设备占比最低，医疗机构次之，其他机构最高。3）压力灭菌器类型方面，疾控机构全部为立式；医疗机构中，采用手提式、双扉式、立式灭菌器的数量分别为4台（6%）、2台（3%）、61台（91%）；其他机构中，采用双扉式、立式灭菌器的数量分别为6台（32%）、13台（68%）。综上，压力灭菌器的类型以立式为主，双扉式次之，手提式最少。4）使用效果和存在问题方面，对于进口产品而言，维修、维保不方便，主要是缺乏专业维保工程师；对于国产某品牌，维修、维保不方便，主要是服务意识差。各机构压力灭菌器进口与国产品牌数量见图4。图4 各机构压力灭菌器进口与国产品牌数量图5显示了不同机构二级生物安全实验室主要防护设备的国产化情况，从图可以看出，二级生物安全实验室关键设备的国产化程度较高，国产设备占比基本超过70%，而且从调研结果可看出，使用效果基本满意。图5 不同机构二级生物安全实验室主要防护设备的国产化比例负压实验室通风空调系统设备在调研样本中，共26个实验室（18个单位）采用了负压实验室通风空调系统，其中疾控机构11个实验室（6家单位），医疗机构6个实验室（4家单位），其他机构9个实验室（8家单位）。排风高效过滤器1）在排风高效过滤器品牌方面，有1个单位采用了1台进口的排风高效过滤器，17家单位采用了25台国产的排风高效过滤器。国产化设备的数量占比高达96%。2）在排风高效过滤器类型方面，箱式BI/BO高效空气过滤装置、风口式高效空气过滤装置、室内柜式高效空气过滤装置的数量和占比分别为：12台（24%）,36台（72%）,2台（4%）。风口式占比最高，箱式BI/BO过滤器占比次之，室内柜式过滤器占比最少。3）在排风形式方面，独立排风和合并排风的数量和占比分别为17台（81%）,4台（19%）。4）维修维保内容方面，主要为：更换新风耗材，清洗或更换过滤网、更换活性炭等。空调机组1）在空调机组品牌方面，进口品牌和国产品牌空调机组的数量和占比分别为：1台（4%），24台（96%）。其中19台空调机组采用了空气净化技术，占比为76%。17家实验室采用了全新风空调系统，占比为68%。空调机组备用方面，4台机组采用每台备用方式， 9台机组采用多台机组共用1台备用机组，其他未注明。送（排）风机备用方面，有2台送（排）风机采用每台备用方式，8台送（排）风机采用多台共用1台备用风机，其他机组备用情况未注明。2）使用中存在问题和维保维修方面，主要为：缺氟、漏水、压缩机故障、风机故障、设备启停，影响房间压力问题；机组变频器、皮带接触器更换配件、加氟、更换皮带、更换过滤网等。3结论1）关于我国二级生物安全实验室口罩选用，在品牌方面，疾控机构国产品牌占比（21%）最低，其他机构国产品牌占比（70%）次之，医疗机构国产品牌占比（85%）最高；使用效果方面，大多为较满意或者基本满意；口罩类型方面，选用N95类型，医疗机构的口罩类型呈现出多样性，除N95之外，还选用一次性使用医用口罩、医用外科口罩等。2）关于我国二级生物安全实验室生物安全柜选用，在品牌方面，疾控机构的国产品牌占比（）最低，其他机构国产品牌占比（）次之，医疗机构国产品牌占比（）最高；类型方面，A2的比例最高，疾控机构和医疗机构的比例分别为和67%，B2次之，疾控机构和医疗机构的比例分别为和25%，A1和B1较少；排风形式方面，独立排风形式占比较高，合并排风形式占比较少。3）关于我国二级生物安全实验室压力灭菌器选用，在品牌方面，进口品牌的数量占比（）远低于国产品牌占比（），国产品牌技术在该领域已相当成熟，并且用户认可度较高；疾控机构的国产品牌设备占比（）最低，医疗机构国产品牌设备占比（）次之，其他机构国产品牌设备占比（）最高；在类型方面，以立式为主，双扉式次之，手提式最少。4）在调研的负压实验室通风空调系统中，关于排风高效过滤器，在品牌方面，国产品牌设备的数量占比高达96%；在过滤器形式方面，风口式占比（72%）最高，箱式BI/BO过滤器占比（24%）次之，室内柜式过滤器占比（4%）最少；在排风形式方面，以独立排风为主，合并排风较少。关于空调机组，在品牌方面，国产品牌设备的数量占比高达96%；在空气净化技术方面，76%空调机组采用了空气净化技术；在空调系统形式方面，68%实验室采用了全新风空调系统。4致谢二级生物安全实验室的调研工作得到了江苏省疾病预防控制中心戎彧老师和浙江省医学科技教育发展中心顾华老师的大力支持，中元国际工程有限公司赵侠老师在调研内容的设计以及文章撰写思路方面提出了宝贵的建议，在此表示衷心的感谢。参考文献：[1] 刘晓宇，李思思，赵赤鸿，等. 全国22省（市）负压生物安全二级实验室建设现况的调查分析[J].中国医学装备，2014，11（1）：5-8[2] 谢景欣. 负压二级生物安全实验室设计要点[J].中国公共卫生，2010，26（10）：1231-1232[3] 陈宇轩，赵卫，刘延,等，广州地区一、二级生物安全实验室现状调查[J].现代预防医学，2009，36（14）：2647-2648一直以来，《暖通空调》杂志社的各项工作，尤其是实验室领域的科研及专题活动，得到了业界知名供应商的大力支持，在此特别感谢以下单位：上海埃松气流控制技术有限公司北京易安华美科学技术有限公司天津市昌特净化工程有限公司山东沃柏斯实验室工程有限公司上海沪试实验室器材股份有限公司山东新华医疗器械股份有限公司苏州市金燕净化设备工程有限公司康斐尔过滤设备(上海)有限公司深圳柏安诺科技有限公司南京拓展科技有限公司浙江泰林生物技术股份有限公司扩展知识在生物安全二级实验室内，可以根据不同的应用场景和风险评估选择适宜类型的口罩。比如，在新冠病毒疫情期间，卫健委发布的《新型冠状病毒感染的肺炎防控中常见医用防护用品使用范围指引（试行）》明确：一级生物安全防护：医用外科口罩、乳胶手套、工作服、医用防护帽，加手卫生。二级生物安全防护：医用防护口罩或N95口罩、乳胶手套、工作服外隔离衣、医用防护帽，加手卫生。酌情可加护目镜。三级生物安全防护：医用防护口罩或N95、双层乳胶手套、面屏、护目镜、工作服外防护服、双层医用防护帽，加手卫生。必要时双层口罩（外医用防护口罩，内N95）。卫健委《新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）》中指出：未经培养的感染性材料的操作：指未经培养的感染性材料在采用可靠的方法灭活前进行的病毒抗原检测、血清学检测、核酸提取、生化分析，以及临床样本的灭活等操作，应当在生物安全二级实验室进行，同时采用生物安全三级实验室的个人防护。灭活材料的操作：感染性材料或活病毒在采用可靠的方法灭活后进行的核酸检测、抗原检测、血清学检测、生化分析等操作应当在生物安全二级实验室进行。分子克隆等不含致病性活病毒的其他操作，可以在生物一级实验室进行。

1.工业建筑：指供人民从事各类生产活动的建筑物和构筑物。包括工业厂房：可分为通用工业厂房和特殊工业厂房。工业建筑在18世纪后期最先出现于英国，后来在美国以及欧洲一些国家，也兴建了各种工业建筑。苏联在20世纪20～30年代，开始进行大规模工业建设。中国在50年代开始大量建造各种类型的工业建筑。2.民用建筑是指非生产性的居住建筑和公共建筑，是由若干个大小不等的室内空间组合而成的；而其空间的形成，则又需要各种各样实体来组合，而这些实体称为建筑构配件。民用建筑由基础、墙或柱、楼底层、楼梯、屋顶、门窗等构配件组成，如住宅、写字楼、幼儿园、学校、食堂、影剧院、医院、旅馆、展览馆、商店和体育场馆等。3.公共建筑，是指供人们进行各种公共活动的建筑。公共建筑包含办公建筑（包括写字楼、政府部门办公室等），商业建筑（如商场、金融建筑等），旅游建筑（如酒店、娱乐场所等），科教文卫建筑（包括文化、教育、科研、医疗、卫生、体育建筑等），通信建筑（如邮电、通讯、广播用房）、交通运输类建筑（如机场、高铁站、火车站、汽车站、冷藏库等）以及其他（派出所、仓库、拘留所）等。

《暖通空调》创刊于 1971 年，是中国建筑科学类核心期刊，国家期刊奖最高奖项获奖期刊，中国暖通空调行业惟一的中央级科技期刊，由建设部主管，亚太建设科技信息研究院、中国建筑设计研究院、中国建筑学会（暖通空调专业委员会）联合主办。本刊以实用技术为主，兼具学术性和信息性，在行业中最具影响力，被誉为权威刊物，深受广大读者喜爱，发行量在国内同行业刊物中遥遥领先。《暖通空调》始终以 “ 新颖、实用、准确、精练 ” 为办刊方针，以提高全行业素质、推动全行业技术交流与发展为宗旨，及时报道国家有关建筑节能和环境保护的重大技术政策，建筑环境与设备工程中供暖、通风、空调、制冷及洁净技术方面的研究成果、学术论文、先进技术、工程总结、设计经验、设备开发与运行管理以及行业学术活动与设备市场信息。《暖通空调》是世界最著名的建筑专业数据库 —— 国际建筑文献数据库 ICONDA 收录期刊，中国科技论文与引文数据库统计分析数据源刊，中国科学引文数据库来源期刊，中国学术期刊综合评价数据库统计源期刊，中国核心期刊（遴选）数据库收录期刊，中国期刊全文数据库收录期刊。《暖通空调》栏目设置：专题研讨、科技综述、标准规范、专业论坛、专题讲座、设备开发、设计参考、工程实例、技术交流、运行管理。《暖通空调》发行对象：从事建筑环境与设备工程中供暖、通风、空调、制冷、洁净等相关领域的工程设计、科研教学、施工安装、设备制造、运行管理的专业技术人员、管理人员、院校师生、房地产开发商和业主，以及对暖通空调制冷技术感兴趣的各界朋友。编辑单位：《暖通空调资讯》编辑部总编：王曙明执行总编：潘晓福执行主编：刘昊编辑部地址：常州市新北区黄山路99-5号4楼

空调教科书上都会有，《实用供热空调设计手册》上也有详细说明；常用的计算程序有鸿业、天正、华电源等等

rna结构论文

RNA称为：核糖核酸，属于核酸的一种，主要由核糖核苷酸组成，构成RNA的核糖核苷酸一共有4种，每种核糖核苷酸都是由三个部分组成：一分子磷酸、一分子核糖和一分子含氮碱基（构成核糖核苷酸的含氮碱基有四种：腺嘌呤A、鸟嘌呤G、胞嘧啶C、尿嘧啶U）。一般中学要求掌握到这么多！

DNA概述DNA即脱氧核糖核酸（英文Deoxyribonucleic acid的缩写）,又称去氧核糖核酸，是染色体的主要组成成分，同时也是组成基因的材料。有时被称为“遗传微粒”，因为在繁殖过程中，父代把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。原核细胞的染色体是一个长DNA分子。真核细胞核中有不止一个染色体，每个染色体也只含一个DNA分子。不过它们一般都比原核细胞中的DNA分子大而且和蛋白质结合在一起。DNA分子的功能是贮存决定物种性状的几乎所有蛋白质和RNA分子的全部遗传信息;编码和设计生物有机体在一定的时空中有序地转录基因和表达蛋白完成定向发育的所有程序;初步确定了生物独有的性状和个性以及和环境相互作用时所有的应激反应.除染色体DNA外，有极少量结构不同的DNA存在于真核细胞的线粒体和叶绿体中。DNA病毒的遗传物质也是DNA,极少数为分子特性稳定性DNA分子的双螺旋结构是相对稳定的。这是因为在DNA分子双螺旋结构的内侧,通过氢键形成的碱基对,使两条脱氧核苷酸长链稳固地并联起来。另外,碱基对之间纵向的相互作用力也进一步加固了DNA分子的稳定性。各个碱基对之间的这种纵向的相互作用力叫做碱基堆集力,它是芳香族碱基π电子间的相互作用引起的。现在普遍认为碱基堆集力是稳定DNA结构的最重要的因素。再有,双螺旋外侧负电荷的磷酸基团同带正电荷的阳离子之间形成的离子键,可以减少双链间的静电斥力,因而对DNA双螺旋结构也有一定的稳定作用。多样性 DNA分子由于碱基对的数量不同,碱基对的排列顺序千变万化,因而构成了DNA分子的多样性。例如,一个具有4 000个碱基对的DNA分子所携带的遗传信息是4种,即10种。特异性不同的DNA分子由于碱基对的排列顺序存在着差异,因此,每一个DNA分子的碱基对都有其特定的排列顺序,这种特定的排列顺序包含着特定的遗传信息,从而使DNA分子具有特异性。发现，发展DNA结构的发现是科学史上最具传奇性的“章节”之一。发现ＤＮＡ结构是划时代的成就，但发现它的方法是模型建构法，模型建构法就像小孩子拼图游戏一样的“拼凑”法。而在这场“拼凑”中表现最出色的是沃森和克里克。1928年4月6日，沃森出生于美国芝加哥。16岁就在芝加哥大学毕业，获得动物学学士学位，在生物学方面开始显露才华。22岁时取得博士学位，随后沃森来到英国剑桥大学的卡文迪什实验室，结识了早先已在这里工作的克里克，从此开始了两人传奇般的合作生涯。克里克于1916年6月8日生于英格兰的北安普敦，21岁在伦敦大学毕业。二战结束后，来到剑桥的卡文迪什实验室，克里克和沃森一样，对DNA有着浓厚的兴趣，从物理学转向研究生物学。当时人们已经知道，ＤＮＡ是一种细长的高分子化合物，由一系列脱氧核苷酸链构成，脱氧核苷酸又是由脱氧核糖、磷酸和含氮碱基组成，碱基有４种。在1951年，很多科学家对DNA的结构研究展开了一场竞赛。当时有两个著名的DNA分子研究小组，一个是以著名的物理学家威尔金斯和化学家富兰克林为首的英国皇家学院研究小组，他们主要用X射线衍射来研究DNA结构。一个是以著名化学家鲍林为首的美国加州理工大学研究小组，他们主要用模型建构法研究DNA结构，并且已经用该方法发现蛋白质a螺旋。1951年2月，威尔金斯将富兰克林拍的一张非常精美的DNA的X光衍射照片在意大利举行的生物大分子结构会议上展示，一直对DNA有浓厚兴趣的沃森看到这张图时，激动得话也说不出来，他的心怦怦直跳，根据此图他断定DNA的结构是一个螺旋体。他打定主意要制作一个DNA模型。他把这种想法告诉了他的合作者克里克，得到了克里克的认可。沃森和克里克构建DNA分子结构模型的工作始于1951年秋。他们用模型构建法，仿照著名化学家鲍林构建蛋白质α螺旋模型的方法，根据结晶学的数据，用纸和铁丝搭配脱氧核苷酸。他们构建了一个又一个模型，都被否定了。但沃森坚持认为，DNA分子可能是一种双链结构。因为自然界中的事物，很多是成双成对的，细胞中的染色体也是成对的。之后他们分别完成了以脱氧核糖和磷酸交替排列为基本骨架，碱基排在外面的双螺旋结构(如图一)，和以脱氧核糖和磷酸交替排列为基本骨架，碱基排在内部，且同型碱基配对的双螺旋结构（如图二）。1952年，生物化学家查伽夫访问剑桥大学时向报道了他对人、猪、牛、羊、细菌和酵母等不同生物DNA进行分析的结果。查伽夫的结果表明，虽然在不同生物的DNA之间，4种脱氧核苷酸的数量和相对比例很不相同，但无论哪种物质的DNA中，都有A=T和G=C，这被称为DNA化学组成的“查伽夫法则”。1952年7月，查伽夫访问卡文迪什实验室时，向克里克详细解释了A:T=G:C=1:1的法则。之后，克里克的朋友，理论化学家格里菲斯通过计算表明，DNA的4种脱氧核苷酸中，A必须与T成键，G必须与C成键。这与查伽夫法则完成一致。随后，鲍林以前的同事多诺告诉沃森，A-T和G-C配对是靠氢键维系的。以上这些工作，就成了沃森和克里克DNA分子模型中A—T配对、G—C配对结构的基础。至此，DNA模型已经浮现。2月28日，沃森用纸板做成4种碱基的模型，将纸板粘到骨架上朝向中心配对，克里克马上指出，只有两条单链的走向相反才能使碱基完善配对，这正好与X光衍射资料一致。完整的DNA分子结构模型完成于1953年3月7日。根据这个模型，DNA分子是一个双螺旋结构，每一个螺旋单位包含10对碱基，长度为34埃（1埃=10-10米）。螺旋直径为20埃。4月15日，沃森和克里克关于该模型的第一篇论文在《自然》（Nature）杂志上发表。DNA分子双螺旋结构模型的发现，是生物学史上的一座里程碑，它为DNA复制提供了构型上的解释，使人们对DNA作为基因的物质基础不再怀疑，并且奠定了分子遗传学的基础。DNA双螺旋模型在科学上的影响是深远的。有人说沃森和克里克的诺贝尔奖是站在“巨人的脚趾”上获得的，我不这么认为，在X光衍射照片的基础上，运用鲍林研究蛋白质螺旋的方法，综合DNA化学研究方面的资料，沃森和克里克，特别是沃森，有着更宽广的眼界，从各专家处汲取所需，而得到新的综合结果，而且这种综合结果比其各部分更伟大，这是那些不能聚木为林的专家们无法领悟到的

靶向血管紧张素Ⅱ受体基因的短发夹RNA的功能比较【关键词】 RNA干扰；高血压；血管紧张素Ⅱ受体；载体Gene silencing targeted to the rat AT1 receptors by efficient shRNAs and its screening 【Abstract】 AIM: To investigate the efficacy of short hairpin RNAs (shRNAs) to modulate the expression of rat angiotensin Ⅱ type1 (AT1) receptor gene in mammalian cells and to explore the correlations between the features of efficient shRNAs and shRNAs functionality. METHODS: We generated 4 shRNAs expression vectors targeting against rat angiotensinⅡ receptors. The shRNAs were targeted to 4 different regions of the same gene. The rat C6 glioma cells were transfected with constructed pGenesil1shRNA plasmid and scrambled plasmid. The cultured cells were collected at different phases for RTPCR and Western blot analyses. RESULTS: 24 h later, no significant reduction in AT1 mRNA levels at all treated groups could be detected. 48 h later, AT1 mRNA level of Pb treated group droped to (±)% of that in control group, and reached their lowest point after 72 h (±)%. No significant inhibition of AT1 receptor mRNA expression was found in other groups (P＞). The AT1 mRNA and protein levels behaved ultimately similarly. At hour 24 and 48, the AT1 protein was (±)% and (±)% respectively compared to control and a maximum reduction was observed after 72 h incubation 〔(± compared to controls)〕. CONCLUSION: Besides some general rules, we believe that the loop structure in the mRNA at the region targeted by siRNA and the better accessibility of the siRNA to targeted mRNA do have a strong effect on silencing. 【Keywords】 RNAi; hypertension; angiotensinⅡreceptor; vector 【摘要】目的：研究哺乳动物细胞中shRNA调节大鼠血管紧张素Ⅱ1型受体基因表达的有效性并探索有效shRNA的特征与shRNA功能性之间的关系. 方法：设计并构建四个靶向大鼠AT1受体基因不同区域的shRNA表达载体，转染大鼠神经胶质瘤C6细胞，并在不同时相收集转染的细胞，进行RTPCR和Western blot检测. 结果：转染24 h之后，各处理组均未见AT1 mRNA水平有明显减少. 与对照组相比，Pb组在转染后48 h血管紧张素Ⅱ受体mRNA基因水平下降到（±）%，72 h后达到最低点（±）%. 其它组AT1受体mRNA表达无明显抑制(P＞). 抑制大鼠血管紧张素Ⅱ受体mRNA基因及其蛋白的结果类似. 与对照组相比，Pb组血管紧张素Ⅱ受体蛋白在24 h和48 h分别减少至（±）% 和（±）%，最大减少在转染后72 h （±）%. 结论：选择有效的shRNA序列时，除了一般的原则之外，靶位mRNA的环状结构及siRNA是否能到达靶位对基因干扰实验能否成功具有重要作用. 【关键词】 RNA干扰；高血压；血管紧张素Ⅱ受体；载体基因干扰（RNA interference）可以特异性地靶向降解目的基因mRNA，从而使组织或细胞中的靶基因表达减少或沉默〔1〕. 在本实验中，我们采用RNAi技术，拟靶向降解大鼠神经胶质瘤C6细胞中的血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）的mRNA，选取并合成了多条编码大鼠AT1R mRNA的短发夹RNA（shRNA）的核苷酸单链，退火形成双链结构并将其克隆进入质粒载体，在构建完成四条编码AT1R shRNA的表达载体之后，转染C6细胞. 根据不同核苷酸序列shRNA质粒在哺乳动物细胞内的功能表达，研究核苷酸序列及碱基不同的shRNA其靶向沉默大鼠AT1R的作用差别，探索筛选有效shRNA的原则. 1材料和方法 1．1材料载体pGenesil1质粒购自武汉市晶赛生物工程技术有限公司，限制性核酸内切酶BamHⅠ，HindⅢ，SalⅠ，PstⅠ购自大连宝生物工程有限公司; T4 DNA连接酶及缓冲液购自New England Biolabs公司; 大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞购自中国典型物保藏中心; 细胞培养液DMEM购自Hyclone公司; 转染试剂Metafectamine购自德国Biotex公司. 所有的DNA合成及引物合成服务均由上海博亚生物技术有限公司提供. 1．2方法 1．2．1靶基因AT1R mRNA的shRNA的构建在GenBank上选取大鼠AT1R的基因序列（序列号NM_030985），利用网上设计软件siRNA Target Finder，选取siRNA以碱基TT结尾、长度为21个核苷酸的序列，并且GC含量最大不超过60%，剔除含有连续四个或四个以上的A或T碱基的核苷序列，并通过BLAST验证的靶基因核苷酸序列四条，化学合成编码shRNA序列的DNA前向和反向序列单链如下：靶基因核苷酸序列同时设计一对非特异性序列作为阳性对照. 将合成的shRNA序列退火，与线性化的pGenesil1质粒连接，转化并提阳性克隆，PstⅠ和SalⅠ酶切和测序鉴定证实.以上不同的靶基因序列质粒分别称为pGenesilA（Pa），pGenesilB（Pb），pGenesilC（Pc）和pGenesilD（Pd）质粒. 1．2．2细胞培养及转染按2×108/L密度以相同的细胞数接种培养板，过夜至细胞铺满50%～60%. 用Metafectamine转染细胞，按1∶6的比例，根据试剂提供商的转染方案进行转染. 1．2．3RTPCRAT1基因引物序列为：5′TGTTCCCTTTCCTTATCATTCT3′, 5′CTTTGCTTGGTTACT CCTTCA3′，内参GAPDH的引物序列为：5′TTCAACGGCACAGTCAAGG3′, 5′TTAGTGGGGTCT CGCTCC3′. 反应体积25 μL包括5 μL cDNA，各引物 μL， μL MgCl2， μL Taq DNA聚合酶， μL dNTP混合物和5 μL 10×缓冲液. 反应条件: 在94℃退火3 min之后，94℃ 15 s，55℃ 15 s，72℃ 15 s进行30个循环. 毕后，产物上琼脂糖凝胶电泳. 1．2．4Western Blot分析转染pGensilAT1shRNA质粒和对照质粒之后，不同时相收获C6细胞. PBS液洗涤后，上样缓冲液溶解细胞. 煮沸溶解液10 min后，离心，取上清，弃沉淀物. 确定蛋白浓度. 电泳分离细胞溶解液，转膜. 50 g/L脱脂奶封闭后，加入抗AT1抗体（1∶1000）和抗βactin抗体（1∶1500）室温下孵育 h，再加入二抗（抗兔HRP抗体）孵育，增强型化学发光显色.统计学处理：根据RTPCR和Western Blot分析结果，用图像处理软件ImageTool 测灰度值，并与内参照相比得相对值. 用SPSS 统计软件oneway ANOVA进行组间方差分析. 显著性水平为P＜. 2结果 2．1不同shRNA表达质粒靶点及二级结构我们选择大鼠血管紧张素Ⅱ受体基因mRNA序列的部分序列,即556~575 bp，469~488 bp，595~614 bp， 663~682 bp,做为基因沉默靶位（图1）. 构建了四条碱基序列不同的pGenesilAT1shRNA质粒，预计产生的短发夹RNA如图2所示. 除在3′端缺乏两个连续的胸苷之外，AT1shRNA的正义链与大鼠AT1基因的mRNA序列的靶位基因序列是相同，反义链与靶序列互补. 其转录产生的RNA，预计可以折叠成短发夹siRNA. 所转录出的shRNA在理论上应可裂解靶基因mRNA，而经重新洗牌的对照质粒所转录出的shRNA则不应对AT1受体基因产生有效的基因沉默效应. 2．2AT1shRNA转染后AT1 mRNA水平和蛋白表达转染四组阳性质粒24 h后，各组AT1 mRNA水平无明显减少. 在48 h后与对照组相比，转染Pb质粒组的AT1 mRNA表达水平下降到（±）%，72 h下降到最低点〔仅为对照组的（±）%〕. 转染重新洗牌的siRNA大鼠神经胶质瘤C6细胞其AT1受体mRNA表达水平无明显抑制(P>). 结果提示，Pb质粒明显抑制了AT1受体mRNA基因的表达，其它三组质粒抑制AT1受体mRNA基因作用不显著（图3，4）. 将抑制AT1受体mRNA有效的Pb质粒进行Western Blot分析. 在24 h和48 h，AT1蛋白的表达分别为（±）% 和（±）%. 与对照组相比，表达减少的最大时相在转染后的72 h〔仅为对照组的（±）%〕. 结果表明，Pb质粒转染的细胞，AT1蛋白水平下降. 而转染重新洗牌的shRNA质粒和对照组则并不能减少AT1基因的表达（图5）. 所有的结果清楚表明，转染Pb质粒能够抑制AT1基因的表达. 3讨论肾素血管紧张素系统其主要的效应分子血管紧张素Ⅱ具有调节血压、水钠平衡、神经功能等作用. 研究证实，血管紧张素Ⅱ参与了动脉硬化、心肌梗塞、血管和心肌重塑以及充血性心力衰竭的病理生理过程. 血管紧张素Ⅱ通过直接激活AT1R并间接刺激一些生长因子和细胞因子的释放，诱导心肌细胞,血管细胞肥厚和增生〔2〕. 同时也可刺激AT2，激活与AT1相反的生物学效应而导致血管扩张、缓激肽生成增加、抑制纤维化和血管重塑〔3〕. 本研究构建AT1短发夹RNA表达质粒，试图用基因沉默技术抑制哺乳动物细胞的AT1 mRNA的表达，希望在阻滞AT1受体之后，通过血管紧张素Ⅱ对AT2的作用，达到血管扩张，降低血压、抑制血管重塑等目的〔4〕. 实验结果表明，我们观测到AT1基因mRNA的表达在早期即有减少，而随着mRNA水平的抑制，相应的蛋白也有所减少. 结果表明，U6启动子驱动的shRNA序列可有效地和特异地抑制AT1基因在转染的C6细胞中的表达. 因此，通过shRNA的表达，在细胞中抑制与高血压病理生理相关的AT1基因的表达，有可能成为一种有效的治疗方法. 目前尚无选择siRNA序列的共识性意见或标准〔5〕. 为了优化siRNA诱导的基因沉默效率，许多研究小组对寡核苷酸长度、二级结构及siRNA双链的序列特异性进行了研究. 普遍认为〔6〕，siRNA序列应在靶基因起始密码子下游100个碱基之后进行选择，应避开起始密码子的5′或3′端非编码区选择siRNA序列. 选择的正义链序列应是AA（N19）TT，其中N代表任何核苷酸，即选择的siRNA应该有两个尿嘧啶核苷的3′突出末端. 并且所选的siRNA的长度应是21个核苷酸. 决定RNA干扰研究成功与否的因素还有很多，包括靶位在mRNA三级结构中的位置、转染效率以及双链shRNA的特异性等〔7-8〕. 在比较本实验中设计的四条质粒时我们注意到，其中Pc和Pd的靶向裂解部位均位于靶基因mRNA二级结构中的核心位置尤其以Pd明显，这可能是质粒转染细胞后转录产生的短发夹RNA在与RISC (RNA诱导的基因沉默复合物)结合后无法进入靶mRNA裂解部位而导致实验失败的原因之一. 而Pa和Pb的靶向裂解部位位于靶基因mRNA二级结构中的表面位置，但质粒Pa也无效，分析可能的原因：①质粒Pa的GC含量偏低可以导致对靶基因mRNA的识别效率的减少; ②与RISC杂交效率的下降. 除此之外，我们还发现Pb质粒裂解靶基因的局部二级结构比质粒Pa裂解的部位更松散一些，也就是前者靶位中的氢键相对弱于后者的靶位. 在这些影响因素中，我们认为最重要的因素是siRNA能否进入靶位，而靶位中mRNA的结构是否足够松散，允许siRNA与RISC复合体进行靶向裂解. 总之，在进行短发夹RNA设计时，除了要遵循如靶序列应位于开放阅读框，而不能选择非编码区；GC含量应在50%左右；避开起始密码子后至少100个碱基；搜索5′AA（N19）序列并进行BLAST等一些普遍的规则〔9〕之外，我们认为siRNA能否进入靶裂解部位并且靶位的二级结构是否松散是有效shRNA合理设计并取得实验成功的最重要的因素. 【参考文献】〔1〕 Fire A, Xu S, Montgomery MK, et al. Potent and specific genetic interference by doublestranded RNA in Caenorhabditis elegans〔J〕. Nature, 1998, 391（6669）:806-811. 〔2〕 Dinh DT, Frauman AG, Johnston CI, et al. Angiotensin receptors: Distribution, signaling and function〔J〕. Clin Sci(Lond)， 2001,100(5): 481-492. 〔3〕 Levy BI. Can Angiotensin II Type 2 receptors have deleterious effects in cardiovascular disease? Implications for therapeutic blockade of the reninangiotensin system〔J〕. Circulation, 2004, 109(1): 8-13. 〔4〕 Esler M. The sympathetic system and hypertension〔J〕. Am J Hypertens Suppl, 2000, 13(6):99S-105S. 〔5〕 Wadhwa R, Kaul SC, Miyagishi M, et al. Knowhow of RNA interference and its applications in research and therapy〔J〕. Mutat Res, 2004, 567(1):71-84. 〔6〕 Miyagishi M, Hayashi M, Taira K. Comparison of the suppressive effects of antisense oligonucleotide and siRNAs directed against the same targets in mammalian cells〔J〕. Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2003, 13(1): 1-7. 〔7〕 Miyagishi M, Taira K. Development and application of siRNA expression vector〔J〕. Nucleic Acids Res Suppl, 2002,(2): 113-114. 〔8〕 Hamada M, Ohtsuka T, Kawaida R, et al. Effects on RNA interference in gene expression (RNAi) in cultured mammalian cells of mismatches and the introduction of chemical modifications at the 30ends of siRNAs〔J〕. Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12(5): 301-309. 〔9〕 Elbashir SM, Harborth J, Weber K, et al. Analysis of gene function in somatic mammalian cells using small interfering RNAs〔J〕. Methods, 2002, 26(2): 199-213.

转运RNA：一种由76-90个核苷酸所组成的RNA

rna研究论文

自己去NCBI上找多得去了比如下面是Nature的一篇Review

非洲鼓课程为主题的论文

音乐是世界上不可或缺的艺术，它使千千万万的人为之心驰神往。《幼儿园教育指导纲要》中明确指出：在幼儿园音乐活动中，打击乐演奏与其他种类音乐活动一样，有着非常重要的位置。非洲鼓作为徒手打击演奏乐器，节奏感强，其沉厚有力的声音、清脆明亮的节拍、强劲鲜明的节奏深深地吸引了我们。为了带给孩子极强的音乐体验，城区义井幼儿园尝试以“非洲鼓乐器”为教学载体，将非洲鼓教学融入幼儿园音乐教学活动，以“ 游戏 ”为基本方式，融合奥尔夫、柯达伊、达尔克罗兹三大音乐教学法的核心教学理念，让孩子在“玩中学、学中玩”，寓教于乐，注重培养孩子音乐节奏感的同时整体提升孩子的音乐素养。丰富自主的教学环境点燃幼儿的音乐热情环境是重要的教育资源，幼儿园应通过环境的创设和利用，有效地促进幼儿发展。我们充分认识到了环境这一资源的教育价值，创设了班级音乐区，满足孩子自由自主体验、表达表现的愿望。注重提高幼儿的音符识读能力。我们根据孩子的年龄特点，在音乐区配备了音符识读卡。小班用生动的动物、人物等图片，吸引幼儿模仿动物的叫声、动作等来初步感应音符的时值。中班的音符识读突出操作感应。如：合拍的拍、读音符练习。大班突出音符的视听训练，准确的识读音符卡，合拍的感应节奏。运用节奏图谱帮助幼儿理解音乐。我们在音乐区设计了十六宫格，将音乐图谱设计在宫格中，指导幼儿分析理解音乐，通过图示引导、器乐表演等方法，培养幼儿表现、创编、分析、运用节奏的能力。音乐区投放了足够数量的非洲鼓，为幼儿亲身操作、实际体验创造了条件，幼儿在自主选择、体验的过程中循序渐进、日积月累，逐步构建起对音乐节奏的感觉，体验到节奏带给孩子成长的快乐。音乐教育必须能够唤起人与生俱来的音乐本能，孩子天生喜欢敲敲打打，非洲鼓体验不仅可以满足孩子的情感需求，而且为孩子自由表达、表现和感受音乐节奏创造了条件，孩子在非洲鼓拍奏中充分感受到了音乐节奏的魅力，萌发了幼儿对音乐的兴趣，点燃了孩子的音乐热情。灵活多样的教学模式唤醒幼儿的音乐本能瑞士音乐教育家达尔克罗兹认为：音乐中最强有力的要素，与人的生命关系最为密切的是节奏，节奏首先是声响运动和情感体验的基础，他认为人具有天性的节奏本能，教师从儿童本具有的节奏感出发，以听音乐和人身体运动为手段，通过节奏运动使身心和谐发展，唤醒儿童音乐的本能。非洲鼓是典型的打击乐器，节奏灵活多变，幼儿在快乐的学习体验中不仅能轻松掌握不同的音乐节奏，而且对提升幼儿音乐素养起到了重要的作用。我们在教学实践中运用歌、舞、乐、演等丰富的教学形式让幼儿参与、体验、建构、创造，唤起幼儿的学习兴趣，让孩子在非洲鼓乐演奏中对音乐产生共鸣。儿歌童谣与节奏相结合，增加活动的趣味性。我们将孩子喜欢的朗朗上口的儿歌童谣采用不同的变奏形式进行朗读，让孩子在感应不同节奏的同时享受变奏的快乐。结合非洲鼓进行轮奏、合奏、接龙等游戏，丰富演奏形式。音乐游戏与非洲鼓演奏相结合，感受活动的快乐。如：《会跳舞的小猴》《泡泡糖》《哇卡哇卡》等，教师巧妙地将音乐与非洲鼓演奏相融合，幼儿在快乐的体验中充分地表达、表现音乐。打击乐演奏与非洲鼓相结合，感受节奏的魅力。如：《木瓜恰恰恰》《森林狂想曲》《鞋匠之舞》等，动感的节奏，跳动的音符，带给孩子沉浸式的学习体验，真正感受到节奏的快乐。节奏是音乐的灵魂，孩子只有用心触摸到音乐的骨骼，感受到音乐所表达的情感之后，才能完整地理解音乐，才能更好地表现音乐。非洲鼓教学，不仅带给了幼儿别样的音乐体验，而且对培养幼儿的音乐综合感知能力产生了深远影响。别开生面的活动体验激活幼儿的音乐天赋以活动为载体，让孩子在丰富多彩的非洲鼓演奏活动中收获快乐、提升音乐素养。我园利用节日、大型活动等，定期开展幼儿非洲鼓表演。如：庆“六一”乐动宝贝音乐节，通过声、舞、吟、奏等多种形式，将经典诵读、儿歌童谣、音乐游戏与非洲鼓演奏相融合。非洲鼓动感独特的律动深深地吸引着孩子们。孩子们在学习、表演的过程中体验到了神秘、独特的非洲文化，感受到了世界上最原始的声音，同时也逐步掌握了非洲鼓演奏的方法和音乐节拍、节奏的基础知识。孩子在音乐中绽放激情、在参与中享受快乐、在体验中张扬个性，在演奏中激活音乐天赋。（城区义井幼儿园白彩霞）

首先来科普一下什么是非洲鼓? 再来欣赏一下一位助学老师画的非洲鼓这位来自河南省登封东华镇袁村小学的常金营老师，在2020年秋季学期开学时，从互加美丽乡村大课表上选择了一门本学期新开设的“快乐非洲鼓”课程。从教30多年的常老师从外孙家里借来一面非洲鼓，第二天带去学校让自己班里的孩子们试学，孩子们非常喜欢这面鼓和这门课程，当天快乐非洲鼓的打卡作业是画一面鼓，于是常老师就“依葫芦画瓢”写生借来的这面非洲鼓，这绘画的功底则来源于常老师从2019年就带孩子们参与《山里红美术》课程，也是和孩子们一起学来的。后来常老师班上的三个孩子自发买了三面非洲鼓，和班里的孩子们一起参与互加新学堂每周三上午的快乐非洲鼓课程。互加新学堂《快乐非洲鼓》课程是以“非洲鼓”切入点，每节课一个音乐主题，带学生们认识非洲鼓，学会基础鼓点，同时学会简单创编。“快乐非洲鼓”不仅仅是音乐课，而是在音乐中让孩子们了解人文性，在节奏中感受数理化，是结合音乐、数学、物理、人文、心里多种科目的跨界融合课程。该课程由互加计划N师第五期学员们创编，由西安外事学院的陈怡彤老师主讲。认识非洲鼓孩子们学习第一课《非洲音乐之旅》后，详细了解了非洲鼓的起源，非洲鼓的故事，对非洲鼓课程充满强烈的好奇心和求知欲。来自四川省翠屏区宋家镇中心小学校的刘璐老师说：“课堂里关于非洲的图片和视频吸引了孩子们的视线，能感觉到孩子们从一开始看到黑色人种的不了解，觉得好笑，到经过学习不由自主的被热情奔放的非洲音乐所感染，整个过程都让人觉得意义非凡，甚至在课堂上好几个孩子跟随着音乐情不自禁的拍起了桌子”。孩子们好动、喜欢拍拍打打的天性在这样的课堂里尽显无疑。快乐非洲鼓第一课，打开了孩子们的眼界，感受了不同音乐风格，丰富了他们的世界观。在《探秘非洲鼓》这一课中孩子们重点认识了非洲鼓的结构，非洲鼓的材质，体验非洲鼓乐感。来自云南省广南县黑支果乡中心小学的周涛老师说：“儿童学习音乐最好从打击乐开始学习，因为打击乐最容易发出声音，没有音准上的困扰，能满足孩子制造音响的欲望，降低学习上的挫折，打击乐教学必将成为音乐启蒙教育的趋势。而非洲鼓课程完全满足了这些条件。” 孩子们们眼中的“咚嘟哒”课程非洲鼓是用手拍打不同的位置而发出不同的声音，《寻声击鼓》这一课主要让孩子们掌握拍非洲鼓的手型，低音手掌聚拢拍，中音四指并拢，用前手掌敲击。高音，四指分开，用第一指节。敲击的部位不同，音高也会不同:中央为低音，边缘为中高音。低、中、高音对应的声音为“咚(B)、嘟(T)、哒(S),自然的孩子们把快乐非洲鼓课程又叫“咚嘟哒”课程。同时孩子们还破解了声音的密码:了解到声音是由物体的振动而产生的，振动的频率越快，音调越高，振动的频率越慢，声音越低。来自河南省陕州区城村小学四年级孙科琳同学用绘画的方式记录下打鼓的位置和手势。她说：“我用文字表达不出来，但是我一看到我的绘画笔记，我就知道打鼓的位置及对应的手势”《战“鼓”妙用力》这一课让孩子们掌握了打鼓手法，孩子们最关心的是没有非洲鼓怎么体验练习这样美妙的天籁之音呢？陈怡彤老师说只要掌握了低（B）、中（T）、高（S）的手法，巧妙用力，可以把身边的任何物体当做“非洲鼓”，来演奏属于自己的“非洲鼓”乐曲了。于是孩子们利用课桌面、水桶、洗脸盆、枕头、抱枕来演奏咚(B)、嘟(T)、哒(S)的天籁之音，孩子们在““咚嘟哒”课程”课堂里体验着来自于自己创作的音乐，自我肯定充满整个空气里。来自河南省登封东华镇袁村小学 9岁的袁怡聪带着班里的同学们拍出了“兴趣”，拍出了“快乐”！来自江西于都县祁禄山中心小学老师在小打卡里反馈说：“敲打中低音时，鼓声像非洲大草原的大象，正在呼叫同伴；高音时，非洲鼓似乎变成了奔跑的羚羊，灵巧又迅捷；混奏时，犹如幼儿在幼儿园嬉戏、打闹一般……” 结合多种科目的跨界融合课程快乐非洲鼓课程不仅仅是单一的音乐文化课，以非洲鼓的节奏和律动为基础，结合音乐、数学、物理、人文、心理学多种学科融合的综合性课程。音乐的基础要素，节奏和旋律、和情感的表达。学会看谱，以及非洲鼓的正确敲击方法贯穿每一节课程主题并渗透着多种学科知识。比如在教学，让孩子们寻找身边的声音时了解到声音时由物体的震动而产生的，充分利用了物理知识，在排拍鼓技法教学中，用甲骨文中的“力”引出拍打非洲巧用力，利用腰部的力量，协同全身各部位协调完成拍鼓动作，这样的声音会更完美。在教学音符时充分利用数学中的分数知识，让让孩子们易于理解和掌握。在《非洲鼓的节奏与心理学》、《非洲鼓的易经密码》、《非洲鼓的音符与分数》教学中让孩子们了解到非洲鼓与生活的紧密联系，结合中西方文化、心理学结合教学，充分发掘中西方古典文化在音乐的作用，感受生命的成长和变化，成人也可达到身心灵的解脱和究竟。快乐非洲鼓课程既有传统文化的传承，又有音乐的气息，既有专业的理论知识，又有简单易懂的教学方法，实在让孩子们和老师们爱不释手。生命也有节奏，创编属于每个人的生命之歌生命也有节奏，每一个生命的律动是唯一的，孩子们在快乐非洲鼓课程感受生命独特与美好，发现自己不同于任何人。同时通过自己拍鼓把对世界、对生命的感知用声音传递出来，这是生命天性的释放。第九课《非洲鼓的易经密码》非常有意思，将非洲鼓和我们中国的传统文化联系上了。张老师讲到阴和阳是中国古人与天地对话的工具，长爻代表阳，短爻代表阴。神奇的是，这个还能和非洲鼓的节奏对应上，长爻对应4分音符，短爻对应8分音符。阴阳结合和非洲鼓的节奏都是打开我们心灵的钥匙，非洲鼓虽然只有三个音，但却能表达每一个生命之歌。在《复杂节奏》、《非洲鼓的排列组合》、《春望》、《如何编排演出》这四节课中，主要让学生学会了变换音符顺序创造不同节奏及演出时的服装、队形的选择与设计，并了解到了节目中服装道具的情绪情感以及演出的重要性。 2020年秋季学期快乐非洲鼓一共授课十一节，累计播放763班次，优秀参与学校38所，提交打卡138则，精选53则。孩子们通过系统的学习，孩子们全面掌握了如何在鼓面上找出高中低三个音，三种拍鼓的手势手法以及如何自制小乐器，创编属于每个人的生命之歌。助教张育硕老师说：“我看到了许许多多优秀的一线执教人，他们用自己的教育热情，点亮了千千万万孩童的心，正是他们的坚持和努力，让我们相信信息化时代网络课程，会连接起各地村小孩童们的七彩梦。” 附优秀参与学校名单

非洲鼓起源于西非部落，属于土著民族的传统乐器，携带方便，入门简单，对孩子来说，是非常容易学的乐器。孩子学习的过程中，不仅可以增强孩子四肢的协调性，还可以培养孩子的团队意识。并且孩子学习非洲鼓基本上没有年龄的要求，孩子3岁就可以学，只要孩子喜欢，只要孩子对打击乐感兴趣，就可以让孩子去接触。毕竟非洲鼓的价格不像钢琴价格那么的高，平常家庭都可以购置，而且携带也是非常的方便，没有什么限制性。让孩子学习非州鼓有着很多的好处。下面我们就来说说，学习非洲鼓的好处。「课程介绍」学习非洲鼓，好处到底有哪些？「课程介绍」学习非洲鼓，好处到底有哪些？