人体细胞低温研究现状论文
新城代谢缓慢，人体是恒温动物，要维持生命体的正常运行，需要消耗大量营养物质，，持续低温，会使身体虚弱，抵抗力下降等》
是虚证，记得我BB发高烧后吃了很多消炎片和退热药后，也是持续低温的，后来看中医调理可以。
细胞自然解冻中会破碎，自然解冻中，像动物，过冬能自然解冻不伤身，这个可能唯一。比较快。。由于人类是恒温动物，一旦失温严重，就意味着死亡，所以冬天的时候常会有人冻死，或者进行野外运动和探险的人。在不良天气条件下失温严重也可能会被冻死。
冷冻细胞、器官或者个体，目前的技术其实很难达到，只能达到冷冻细胞并成功复苏。对于不同细胞来讲，需要的冷冻液也不同，所以直接用现有的冷冻液冷冻器官和个体是不可能复苏成活的，毕竟一个器官就有很多种细胞构成。没有合适的冷冻液，那么细胞或器官或个体中的水分子在低温下很容易形成冰晶，对细胞造成破坏，那么就会造成细胞的死亡，所以目前人冷冻后不能复活。
人体细胞低温研究论文题目
低温下细胞代谢慢
人是恒温动物，所以当外界温度降低时，人体会加快新陈代谢，使体温升高。注意，细胞在低温下时是会代谢变慢，那是因为低温使细胞内的酶活性降低，但是人体的细胞都是恒温细胞，温度基本都在37摄氏度左右，不会太低或太高，所以不存在外界温度降低人体细胞代谢变慢。
医学研究广博深繁，医学论文自然也就深奥广达。所以，拟定医学论文题目要精心琢磨，表意精确。下面我给大家带来2021本科生医学 毕业 论文题目有哪些，希望能帮助到大家!
本科生医学论文题目
1、临床医学本科生综合素质评价指标体系的初步研究
2、以基层就业为导向的医学本科生就业能力提升对策的研究
3、青年教师在医学院校本科生导师制中的作用
4、医学本科生对《医学科研设计》课程的认识及需求分析
5、军校医学本科生自我导向学习倾向及其影响因素分析
6、本科生《医学免疫学》课堂教学与课外活动结合的初步探讨
7、医学本科生在学期间发表科研论文的调查分析
8、江苏省医学本科生面向基层就业意愿研究
9、云南医学本科生生活质量及影响因素调查分析
10、医学本科生对临床专业课双语教学的理解和要求
11、医学本科生与专科生心理健康状况的比较
12、医学院校实行本科生导师制的思考
13、普通高等医学院校本科生导师制初探
14、医学专业本科生就业 市场调查 与分析——以广东省为例
15、科研实验室开放对培养医学本科生创新与科研能力的作用初探
16、四川大学医学本科生择业意向的调查分析
17、浅谈中医类本科生医学统计学教学体会
18、PBL教学法在医学本科生医学统计学实验教学中的应用
19、医学本科生积极心理资本与主观幸福感的相关性研究
20、少数民族医学本科生学习适应性现状及其影响因素研究
医学检验免疫毕业论文题目
1、基于纳米颗粒的分子展示应用于超灵敏检测
2、SLE患者中几种新型自身抗体的检测及其临床诊断价值的探讨
3、多肽酶检测和细胞表面荧光标记的新 方法 研究
4、区域检验服务协同平台的设计与实现
5、胶体金喷膜仪的设计与开发
6、重庆市乡镇卫生院医疗资源的调查研究
7、基于氧化石墨烯和硫化铅纳米颗粒的荧光生物传感器研究
8、产气荚膜梭菌α毒素快速诊断金标试纸条的研制及初步应用
9、纳米粒子免疫层析法在检测异位妊娠和膀胱癌中的应用
10、现代医院检验科模块化设计研究
11、酶免工作站监控系统的设计与实现
12、乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估
13、基于微型压电与光谱生化分析系统的POCT新技术研究
14、长江三角洲地区犬猫皮肤真菌病调查及体外药敏试验
15、我国医学检验本科专业人才培养的问题与对策研究
16、基于电化学分子信标基因传感技术的HIV-1核酸检测新方法研究
17、Free β-hCG和PAPPA光激化学发光免疫分析试剂的研制
18、乙肝快速分析仪的研究与开发
19、阿托伐他汀对动脉粥样硬化患者外周血中PPAR γ的作用研究及相关炎症因子与动脉粥样硬化关系的建模分析
20、综合性医院医学检验资源优化管理研究
21、全自动多功能免疫检验过程关键问题的优化研究
22、HMGB1通过NF-κB激活TGF-β1诱导特发性肺纤维化发病机制的研究
23、若干病毒感染模型的动力学分析
24、现代综合医院检验中心空间设计研究
25、大型公立医院创建医学独立实验室可行性研究
26、高血压病证型与血清褪黑色素水平的相关性研究
27、医用臭氧与α-干扰素对照治疗慢性乙型病毒性肝炎
28、网织血小板在系统性红斑狼疮患者的临床应用
29、G公司第三方独立医学实验室服务营销策略研究
30、临床毛细管电泳的研究
31、基于光电检测与信息处理技术的纳米金免疫层析试条定量测试的研究
32、贫铀长期作用后的吸收分布特点及其主要蓄积器官的损伤效应研究
33、基于磁性微球的PMMA微流控免疫分析芯片系统的研究
34、hr HPV、L1壳蛋白、p16蛋白与宫颈病变的关系及诊断价值研究
35、76例急性白血病的MICM分型及预后
36、国产化学发光法诊断系统检测乙肝表面抗原的评价
37、蛋白A-藻蓝蛋白β亚基双功能蛋白的性质及其在免疫检测中的应用
38、上海市社区卫生服务中心检验开展现状及检验项目合理化设置研究
39、__医学检验集团发展战略研究
口腔医学毕业论文题目
1、伴有或不伴有下颌偏斜的骨性Ⅲ类成人患者颞下颌关节形态和位置的CBCT研究
2、口腔锥形束CT对下颌牙 种植 位点线性测量精度的实验研究
3、牙龈卟啉单胞菌感染牙周膜成纤维细胞的体外实验研究
4、无牙颌种植修复临床回顾性研究及无牙颌种植固定修复咬合初步分析
5、产前暴露于纳米氧化锌对大鼠子代脑发育及成年期行为学特性的影响
6、我国入选PubMed数据库的生物医学期刊文献计量学分析
7、电针治疗对颞下颌关节紊乱综合症大鼠TNF-α、IL-1β影响的研究
8、86例腮腺多形性腺瘤外科治疗的回顾和分析
9、口腔黏膜潜在恶性疾患的临床诊治新观点
10、翼外肌在髁突矢状骨折愈合中对髁突应力分布作用的三维有限元研究
11、T-Scan应用于牙根纵裂患者咬合特征分析的初步研究
12、正畸治疗对不同类型错(牙合)畸形患者口腔健康生活质量的影响
13、成人正颌手术前后的心理特征及满意度的相关性研究
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15、自锁托槽矫治器与直丝弓托槽矫治器排齐牙列的对比研究
16、构建3D打印牙齿模型及其形态仿真性研究
17、锥形束CT对下颌乳磨牙牙根及根管形态的研究
18、F大学口腔医学博士学位论文内容和质量研究
19、口腔医学专业人文素质 教育 现状调查及课程教学发展策略
20、口腔医学本科毕业考核中多站式考试的设计及效果评价研究
21、血链球菌细菌素对光滑念珠菌力学性质的影响
22、乳牙根中1/3折保守治疗的应用研究
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27、牙与固定修复体的动力学研究--振动分析和疲劳测试
28、口腔医学专业人才培养方案及系列课程综合改革研究
29、气电纺蚕丝蛋白纳米纤维的制备与组织工程研究
30、张应力诱导大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化的实验研究
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33、等离子浸没注入和多弧离子镀对纯钛及钛合金表面改性的基础研究
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36、口腔修复学教学及临床三维多媒体平台的建立
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39、髁突在咬合载荷作用下的应力效应
40、磨牙烤瓷熔附金属全冠的有限元分析
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烧伤病人体温研究现状论文
医学论文开题报告范文模板
在正式动笔写作毕业论文之前要求学生写出开题报告，以便指导老师能根据学生对文献的综述和对所选论题的认识，确定其可行性。以下是我收集整理的医学论文开题报告范文模板，供大家参考和借鉴。
一、课题意义及国内外研究现状
1、选题意义
慢性肺源性心脏病，简称慢性肺心病，是由肺组织、肺血管或胸廓的慢性病
变引起的肺组织结构和(或)功能异常，产生肺血管阻力增加，肺动脉压力升高，使右心室扩张和(或)肥厚，伴或不伴有右心衰竭的一类心脏病，并排除先天性心脏病和左心病变引起者。肺心病在我国是常见病，多发病。二十世纪七十年代的普查结果表明，>14岁人群慢性肺心病的患病率为‰[1].据流行病学调查，在我国肺心病的发病率较高，人群中的平均患病率为，尤以东北和华北地区较多，在各种器质性心脏病中，肺心病所占的百分比分别为 18%~37%和12%~34%.肺心病患者多数预后较差，病死率在10%-15%左右，原发病及呼吸衰竭是其主要死因[2]，总体说明患病率仍然居高，仍是危害人生命健康的主要原因之一。
随着社会医疗保险制度的建立健全，慢性肺源性心脏病在基层医院的就诊率
增加，使得基层医务工作者对此病的研究越来越多。对于慢性肺心病的治疗原则是积极控制感染;畅通呼吸道;改善呼吸功能;纠正缺氧和二氧化碳潴留、控制呼吸和心力衰竭;控制心力衰竭;积极处理并发症。但在以往的'控制心力衰竭方面主要是增强心肌收缩力，减轻心脏负荷，扩张血管。在增强心肌收缩力方面，洋地黄类药物应用起来有一些弊端，尤其在慢性肺心病患者，常常合并电解质紊乱，因洋地黄安全范围较小，此种情况下极易导致洋地黄药物中毒，限制了洋地黄药物的应用;减轻心脏负荷方面，频繁的利尿易导致痰液粘稠，带来感染不易控制、窒息等麻烦;扩张血管药物会导致血压不稳定，不利于心力衰竭的纠正。如何做到既保证畅通呼吸道，纠正缺氧，又能够及早控制心力衰竭避免病情进一步加重，哪些指标能够尽早提示我们病情的转归，指导我们的治疗，避免过度医疗，成为慢性肺心病临床治疗重要课题。
丹参川芎注射液在呼吸系统疾病中应用广泛，本研究以呼吸内科确诊为慢性肺心病的患者为研究对象，在常规治疗的基础上加丹参川芎嗪注射液治疗，观察检测患者治疗前后，D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白三项指标的变化，评估丹参川芎注射液对慢性肺源性心脏病的治疗效果，这对慢性肺源性心脏病合理治疗，改善患者生活质量，减少患者住院天数，降低医疗资源过度消耗有重要意义。
2、国内外研究现状：
丹参川芎嗪注射液采取祖国传统中医理论为基础研制而成，在国外研究相对较少。该药物价格便宜，应用广泛。在国内已有报道，在常规治疗基础上加丹参川芎嗪注射液有明显改善慢性肺心病患者的血液粘稠度，动脉血二氧化碳分压，动脉血氧分压，血红蛋白，红细胞压积及肺血流图的作用。丹参及川芎嗪均有抑制血小板凝聚，扩张冠状动脉，改善微循环，抗心肌缺血和心肌梗死的作用。丹参还能够调节心律，提高机体耐缺氧能力，有抗凝血，促进纤溶，抑制血栓形成的作用;能够降低血脂，抑制冠脉粥样硬化形成;能够抑制或减轻肝细胞变性、坏死及炎症反应，促进肝细胞再生，并有抗纤维化作用。川芎嗪有明显的镇静作用，而对延脑呼吸中枢、血管运动中枢及脊髓反射中枢具有兴奋作用，并对已聚集的血小板有解聚作用，有降低血液粘度，加速红细胞流速的作用。
亦有研究报道，D-二聚体是交联纤维蛋白特异性降解产物，血液中的D-二聚体是特异性反映体内高凝状态和继发纤溶亢进的标志之一，其水平的增高不仅可反映继发性纤溶亢进的存在，而且也间接地反映凝血酶活性的增强，对慢性肺心病高凝状态的诊断、疗效观察具有应用价值[3].血浆N端脑钠肽在慢性肺心病失代偿期显着升高，对肺心病的病情判断有一定意义，是检测急性充血性心力衰竭一种方便、及时、准确、有效的方法[4].肺心病患者急性发作期肌钙蛋白明显升高是病情危重的可靠信号，及时采取积极有效的救治措施，对于减少患者的病死率有重要意义[5].本研究预采用D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白三项指标，综合评估丹参川芎嗪注射液对慢性肺源性心脏病的临床疗效，用以指导临床用药。
二、课题研究目标、研究内容和拟解决的关键性问题
1、课题研究目标：
(1)明确丹参川芎嗪注射液对慢性肺源性心脏病患者D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白的影响。
(2)合理应用丹参川芎嗪注射液对能否改善慢性肺源性心脏病患者、生存质量、预后以及优化医疗资源配置的意义。
2、研究内容：
(1)观察患者治疗前后病情改善情况：观察HR，Rr，pH，CO2，PaCO2(mmHg)，PaO2(mmHg)，[HCO3-](mmol/L)，SaO2(%)指标。
(2)检测患者治疗前后血浆D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白的生化指标。
3、拟解决的关键性问题：
(1)研究对象在治疗上的依从性，是保证该项研究完整进行的基本条件。(2)患者血浆D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白生化指标的检测，目前在我院呼吸科都能对上述指标进行检测，减少标本送检中间环节，是保证标本信息准确可靠的关键。
三、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及其可行性分析
1、研究方法：
①入组标准：慢性肺心病采用叶任高、陆再英主编第6版内科学“肺动脉高压与肺源性心脏病”诊断标准。
②研究对象收集20xx年1月1日-20xx年12月31日在我院住院的40~90岁所有慢性肺心病患者，按性别、年龄、病情搭配的原则，将研究对象分为：研究组(常规治疗+丹参川芎注射液10ml静脉滴注)，对照组(常规治疗+丹参川芎注射液5ml静脉滴注)。均为1次/日，10-14天为一个疗程。研究组与对照组其他治疗相同。
③实验过程入院24小时内、出院前一天分别做血浆D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白的检测，指标检测器械为：由南京普朗医疗设备有限公司生产FIA8000免疫定量分析仪，标本采集、操作过程均由研究者本人亲自承担。所有研究对象按计划完成血生化检查。血常规、肝功能、肾功能、电解质、凝血功能、二氧化碳、微生物等血生化指标检测均在我院检验科完成。
④数据分析对研究组、对照组各指标进行统计分析。
2、技术路线：
(1)收集病人。
(2)记录数据、整理资料。
(3)统计分析采用统计软件进行分析。
(4)得出结论，撰写论文
3、试验方案：入院24小时内、出院前一天分别做血浆D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白的检测，指标检测器械为：由南京普朗医疗设备有限公司生产 FIA8000免疫定量分析仪，标本采集、操作过程均由研究者本人亲自承担。所有研究对象按计划完成血生化检查。血常规、肝功能、肾功能、电解质、凝血功能、二氧化碳、微生物等血生化指标检测均在我院检验科完成。
4、可行性分析：
(1)冬季慢性肺心病患者数量多，病例资料容易收集，而且丹参川芎嗪注射液在临床上应用广泛。
(2)我们医院呼吸科能够科内独立完成血浆D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白的检测，可以轻松获得实验结果，余相关指标医院检验科也可获得。因此在选题上可行性较强。课题的研究得到科室的大力支持，相信可以圆满地完成课题。
四、课题的创新性
丹参川芎嗪注射液在呼吸科应用广泛，该药物对改善患者微循环已有较多研究。但在以往研究中，较少检测生化指标，或检测指标项目较少而不能全面准确的评估患者病情以及药物疗效，不能及时用来指导临床用药。因此本研究采用丹参川芎嗪注射液对慢性肺源性心脏病患者血浆D-二聚体、N端脑钠肽及肌钙蛋白的影响，以期客观评估临床疗效，及时的指导慢性肺源性心脏病的临床治疗，改善患者生活质量，减少住院天数，减少医疗资源不必要的浪费。
五、计划进度、预期进展和预期成果
1、计划进度：
(1)20xx年10月1日-20xx年12月31日收集病例。
(2)20xx、2整理及分析数据。
(3)20xx、2-20xx、3撰写论文、定稿。
2、预期进展：各项计划规定时间内完成。
3、预期成果：发表2篇文章。
参考文献：
[1]叶任高，陆再英。肺动脉高压与肺源性心脏病。内科学，第6版，第二篇，第九章。
[2]蒲芋伶。浅谈慢性肺源性心脏病的护理和健康教育。求医问药，1672-2523(2012)10-0191-01.
[3]童亚玲，李乾兵，徐建林。慢性肺心病急性加重期患者动脉血气、血浆BNP与D-二聚体、及血流变学相关研究。皖南医学院学报[J]，2013，32(4)：1002-0217(2013)04-0278-03.
[4]仇爱民，陶章，张梅林等。脑钠肽对评估慢性阻塞性肺病和慢性肺源性心脏病严重程度的意义[J].临床肺科杂志。(4)：：631-632.
一、建立选题思路问题的来源有三个途径：1. 从实践中提出问题：从工作实践中发现和寻找题目。例如：口服葡萄糖耐量试验不良反应预防措施的实验研究经皮神经电刺激疗法对术后疼痛病人的作用盆底肌肉训练对压力性尿失禁的作用冷、热敷在静脉输液渗漏后的作用全麻术后患者鼻塞给氧效果的观察音乐疗法对焦虑病人的影响2. 从理论中提出问题：从护理理论中发现和寻找题目。例如：烟、酒的干预研究基于：行为改变受知识态度的影响适应性行为训练对先天性心脏病患儿手术康复的影响综合自护训练对糖尿病人生活质量的效果研究3. 从文献中提出问题：从既往中英文杂志、书刊中寻找护理研究性杂志中华护理杂志 ；实用护理杂志；护理学杂志；护理进修杂志；护理研究；解放军护理杂志；南方护理学报；西北护理杂志；中国医学文摘；护理学；国外医学；护理学分册Nursing research；Clinical nursing research；；Applied nursing research；Research in nursing and health；Western Journal of nursing research；Oncology nursing4.来自其他渠道协作课题； 课题指南 ； 国际基金：例如有关艾滋病人护理方面的研究； 国家基金：例如护理本科生教育改革。 例1每日测体温时间的探讨；例2测量腋温时间的探讨；例3腹股沟与腋下体温测试的对照；例4为老年人测量体温的方法探讨；例5电子体温计与水银体温计腋温测试对照观察。二、选题的原则科学性原则；需要性原则；创新性原则；可行性原则（一）科学性提出的问题必须以理论依据和实践依据为基础提出的假说必须与科学的原理和规律性相符合评价技术路线和指标的参照标准必须具有相应的理论和实践依据必须要有严格的统计学分析等例如： 病人的饮食护理； 高热病人的饮食护理； 夏季高热病人的饮食护理（二）需要性---是否重要；---是否有实用价值；---是否有理论的参考价值；---是否对实践、政策有益处；---是否有新意例如：护理学科发展的设想 ； 医院护理学科发展的设想； 教学医院护理学科发展的设想（三）创造性前人未涉足的领域；新学科、新专业、新理论；对现有理论的补充和修改国外已有报道，尚须结合我国情况进行研究；促使研究成果实用化、商品化（四）可行性1.时间与时间性时间：指研究的期限；时间性：指要考虑研究内容是否同季节、时期有关2. 研究对象：是否在研究期限内找到足够的研究对象3. 其他合作者-- 研究对象的支持系统；-- 其他场所：如社区、其他医院等；-- 化验及检验人员等合作者4. 领导支持5. 伦理方面：是否会给研究对象带来痛苦6. 研究资源：经费、仪器、技术等经费：检索、劳务费、研究对象的补偿、耗材、打字复印、仪器、电脑、实验室检查费、通讯7. 政策和制度8. 研究变量和指标是否敏感和可以测量例如： 烧伤病人创面的细菌学调查 ； 大面积烧伤病人创面的细菌学调查； 大面积烧伤病人创面的护理对策 ； 大面积烧伤病人创面的细菌学调查与护理对策三、当前护理科研的课题母婴护理；孕期保健；低体重儿和早产儿；计划生育与独生子女问题；婴幼儿问题；健康咨询、生活指导、保健指导；畸形儿的护理；住院患儿生活习惯的培养；父母残障儿的护理；长期住院患儿的问题；学龄前儿童和中小学生的护理：卫生保健 、近视 、营养问题 、行为异常 、自闭症企业等单位职工：健康检查、健康咨询临床护理老年人的护理：帮助其健康幸福的度过晚年、老年福利设施的社区利用情况、老年人的心理问题、临终护理其他护理专业的研究：护理教育、护理教育方法的探讨、护理教师的培养、与培养护理科研人员有关的问题、供求关系的研究、护理环境和护理制度、护理人员的身心健康四、选题的注意事项有意义，感兴趣的问题；结合自己熟悉的专业；研究问题的可行性；研究内容避免完全重复别人的工作。不论结果是正效应或负效应，只要实用、合理和可行，都是可选择的。例如：临床病人的护理特点及护理探讨；如何作好老年病人心理护理的探讨；探讨高血压病人的心理护理；探讨内科病人的心理特点和护理；肿瘤病人的护理-卵巢癌化疗病人的护理；压疮问题的探讨---昏迷病人压疮发生率与翻身次数关系的探讨。
国外再造细胞研究现状论文
研究的目的要说明问题是如何发现的，即该研究的研究背景是什么，是根据什么、受什么启发而搞这项研究。也要说明该选题在理论上的创新性，来突出自己选题与各个主流观点的差异。而研究的意义，要对所研究问题的实际用处有所了解从生活实际出发进行解读。
论文国内外研究现状写法如下：
首先，我们要知道国内外研究现状是什么，其实通俗来说，就是国内和国外对于一个研究对象目前的研究现状，可以是国家层面上相关部门对于研究对象的研究，也可以是权威学者，对于研究对象的研究。
所以很明确，国内外研究现状有两种写法，要不就是从相关部门对于研究对象的研究，或者就是从学者对于相关研究现状的研究来写。
正常来说，国内外研究现状都需要大家去阅读大量的文献，然后总结学者的主要观点，这里给大家一个小技巧，可以直接从一篇文章的摘要看出来，一个学者的研究观点主要集中在哪些，这样的话，即便你不完整的阅读文章，也能知道文章的主要观点。
还有一种方法，可以直接从硕士论文里面去摘抄，大家可以找一些和自己题目一样，或者是关键词一样的硕士论文，我们在里面摘抄国内外研究现状，并且将这个话改成自己的意思，这也是一种写作方法。
但是注意标注引用的时候，一定要找到最根本的文章，而不是你参考的这篇硕士论文。找文献去哪里，中文的话我们可以从百度学术或者是知网里面直接观看，主要就是看一篇文章的摘要，因为主要观点都在摘要里。
英文的话，之前有提过从谷歌学术去搜索关键词，就能找到很多的国外文献，这里要注意，查找国外文献的关键词，一定要翻译成英文，如果是中文的话，是没办法识别的，然后只需要把相关的英文文献翻译成中文，再去进行总结就可以了。
非小细胞肺癌的研究现状论文
探索肿瘤微环境(TME)有助于了解潜在的肿瘤-免疫相互作用。如何在有限样本上实现高通量、高精度多组学分析已成为未来肿瘤微环境研究的重要方向，而多重免疫组化（mIHC）技术与分子条形码技术的结合将会更好地帮助科研者对TME进行深入研究。 为了深入研究肿瘤微环境对对非小细胞肺癌(NSCLC)的影响，James Monkman等科学家团队利用DSP技术，通过对NSCLC及配对正常组织中的特定空间区域进行高维度蛋白组学定量分析，描绘了NSCLC中由癌旁到基质微环境到癌组织中的蛋白表达谱变化，并在《Cancers》杂志上（IF=）发表题为“High-Plex and High-Throughput Digital Spatial Profiling of Non-Small-Cell Lung Cancer（NSCLC）”的文章（图1）。 该 研究证明了DSP在数据产出、可靠性和研究实效性上的强大优势，并可作为唯一的技术策略实现大规模临床组织样本的深度微环境解析 。 研究亮点 研究团队使用DSP技术，仅用一张TMA组织芯片，从空间层面将非小细胞肺癌（NSCLC）患者的肿瘤、TME和正常相邻组织划分出来，并从免疫细胞分型、免疫激活、药物靶点和肿瘤多个模块进行多重蛋白靶点（Table 1）比较分析，得到富含空间信息、高维度的蛋白表达图谱。研究团队绘制了活检样本中的肿瘤标志物和分子表型，并展示了DSP技术对新一代病理学研究的强大优势。 研究背景 肺癌被称为头号癌症杀手，非小细胞肺癌占肺癌总数的85%。肺癌常在晚期被确诊，导致其预后很差，五年生存率低于20%。随着新兴疗法免疫检查点阻断疗法的成功应用，15-40%的患者生存期延长，因此需要更为准确的预前分子标志物来指导患者分层治疗。免疫环境（细胞类型、密度和位置以及表型和免疫细胞功能）已被用于更深入地了解肿瘤-免疫细胞相互作用，可以为免疫检查点疗法的突破提供全新的治疗线索。 传统的免疫组织化学（IHC）技术及从组织块获取基因组信息的技术无法同时满足空间信息及多重靶标的需求，并且缺乏细胞占比、异质性和深层次的空间信息，而这些对识别TME是非常重要的，同时珍贵样本，如穿刺样本的限制导致无法在有限样本上获得更多有价值的信息。 研究思路及方法 研究者以92个非小细胞肺癌样本为研究对象制成TMA芯片，运用了DSP技术，在PanCK、CD3、CD45的荧光形态学指导下，将组织划分成为肿瘤、基质TME和相邻正常组织（NAT）三个区域，共96个感兴趣区域（ROI）。该技术通过DNA探针编码偶联的抗体（包含免疫细胞分析、IO药物靶标、免疫激活状态、免疫细胞分型中的主要靶点，具体靶标见Table 1）对同一切片进行孵育，基于可视化形态学染色生成肿瘤（Pan ck+）和TME（CD45+/Pan ck-）区域。DSP通过紫外照射将特定区域的DNA编码分解下来，杂交并用nCounter系统进行计数。 ROI与病人相关信息见Table 2。研究者将用R中“ggplot2”输出和绘制原始数据，并将靶标表达值与阴性内参IgG进行比较来评估表达量，并使用“ggpubr”评估标准化校正参数之间的皮尔逊相关系数，选择了相对表达稳定的Histone H3和S6进行标准化。配对组差异表达用配对t检验和benjamini-hochberg FDR修正进行评估，未配对组差异表达用mann-whitney检验和Benjamini-Hochberg FDR矫正进行评估。同时进行非监督聚类分析，用“Survival Analysis”进行单变量Cox比例风险回归。 研究结果 一、ROI选择策略 作者共设定了96个ROI，其中45个肿瘤区域、32个TME和19个形态正常的邻近组织（具体信息见Table 2）。病理学专家根据H&E标出肿瘤区域（示例图2A,2C），与PanCK（绿色）、CD45（黄色）、CD3（绿色）和核染（蓝色）的形态学标记（示例图2B,2D）一起使用来选择肿瘤（CK+）或TME（CK-/CD3+）的感兴趣区域。其中图2B/2D左下ROI为肿瘤，右上圈选为TME，图3展示了具有代表性的成对肿瘤和免疫ROI，ROI 71、69、74和63代表肿瘤区域，而图上其余ROI分别代表配对患者的免疫区域。二、数据质控 数据质控采用DSP自带分析系统进行。探针计数值根据各ROI内阴性对照兔（Rb）IgG和小鼠（Ms）IgG计数几何平均进行质控（图4A）。作者发现靶标数值因各自的组织类型而不同，例如正常组织ROI原始计数似乎低于其他组织，而肿瘤ROI在最低丰度的探针产生更高的计数（图4B）。在所有ROI内与IgG的均值信号比值均小于1（粉色区域）的靶标，在后续研究谨慎处理，在CD25靶标以上的55个探针中有31个被认为是可信的，可进一步分析（图4A）。三、数据归一化策略 通过Histone H3、S6、GAPDH和IgG阴性对照探针各校正因子之间的相关性来评估ROI的数据标准化方法。研究者对管家蛋白GAPDH、Histone H3、S6和Ms/Rb IgG的平均值（图5）进行两两比较，并进行线性回归分析，管家蛋白在ROI中彼此高度相关（图5A-C），Ms和Rb IgG在ROI中彼此高度相关（R=）（图5D），并且这些IgG计数的平均值与Histone H3和S6平均值显示出很强的相关性（R=），表明IgG阴性对照、Histone H3和S6与基础生物学信息无关，可作为校正因子进行数据标准化（图5E)。另外，研究团队还分析了ROI面积和细胞核计数，以确定它们对DSP数据进行归一化的效用。ROI面积与其他校正因子的相关性较差（图6A-C），因此不适用于此次试验的数据归一化处理，同样可见核计数（6E，D）。最终研究者选择Histone H3/S6均值用于数据标准化以及探针量化比较。 四、数据分析 研究者先使用Ward D2层次聚类法进行聚类，发现不同组织类型内蛋白靶标似乎没有显著差异，NAT、肿瘤和TME之间的区别并不明显（图7）。使用K-means聚类进一步将ROI分组，大多数NAT分在一组（图7左），其特征是除Pan CK、EpCAM和Ki-67之外，大多数基因高表达。另一类包括TME和肿瘤（图7中），大多数蛋白质表达较低，一些ROI内Ki-67和EpCAM高表达，而第三类所有蛋白质表达相对差异较大（图7右）。 接下来研究者评估了配对和未配对患者的差异蛋白表达（图8）。有趣的是，配对的TME和NAT组（n=8）无显著差异（图8A)，配对的TME-肿瘤组(n=18)，TME区域CD27、CD3、CD4、CD44、CD45、CD45RO、CD68、CD163和VISTA高表达（同预期），而肿瘤区域Ki-67、EpCAM和cytokeratin富集（图8B)。 研究者将所有样本合并，发现无论是否配对，TME中CD34、fibronectin、IDO1、LAG3、ARG1和PTEN似乎相对于NAT下调（图8C）。而TME组与肿瘤组的比较与配对数据相似，CD3、CD45RO、VISTA和CD163在TME中表达比肿瘤高（图8D)。通过未调整的单变量Cox比例风险回归对蛋白表达和OS关联进行评估。研究人员发现，ROI（免疫TME内）的EpCAM和cytokeratin表达与更好的OS相关，而肿瘤ROI区域中CD34、CD3和ICOS的存在与更好的OS相关。 当置于多变量模型中，调整年龄、AJCC和TNM肿瘤分期变量时，在单变量模型中显著表达的蛋白表现为不显著，并且由于样本数量不足不能进行更深层次的数据分析。 文章总结 研究团队使用DSP技术，运用TMA策略，绘制了NSCLC微环境图谱，发现了一些新的分子表型，这些有可能预测患者对新疗法的反应，进而预测患者的预后情况。作者认为多重免疫组化结合高通量靶标检测的技术，与TMA联合应用，正在开创一个新的生物标记物发现领域，将会给临床病理学带来很大的改变。