大鼠研究的论文
谈补阳还五汤对脑缺血大鼠神经功能及细胞形态的影响论文
脑缺血属中风范畴，是临床常见病，具有高发病率、高死亡率及高致残率的特点，严重危害着人类健康。迄今为止，国内外在治疗脑缺血及其后遗症方面还缺少有效的化学治疗药物。循证医学表明，中医药对缺血性脑卒中的治疗有一定优势。当前大量研究集中在中药对急性脑缺血损伤的保护作用。而脑缺血后的功能恢复是一个较长时间过程，目前对其进行较长时间观察的研究较少。出自清代王清任《医林改错》的补阳还五汤，是治疗缺血性中风及中风后遗症的经典名方，该方在临床上应用广泛且疗效确切，但其促神经功能恢复机制还需进一步阐明。本文采用大脑中动脉线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型，探讨了补阳还五汤较长时间多时间点对其神经功能的.保护作用，以期为治疗缺血性脑中风临床用药提供实验依据。
1 材料
1. 1 动物健康雄性SD 大鼠189 只，SPF 级，体重260 ～ 280 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，生产许可证号SCXK( 湘) 2009-0004，动物合格证号004535。
1. 2 药物补阳还五汤处方来源于清·王清任《医林改错》，按原方组成: 黄芪120 g，赤芍4. 5 g，川芎3 g，归尾6 g，干地龙3 g，红花3 g，桃仁3 g，药材经湖南中医药研究院鉴定均符合《中国药典》2005 年版标准。补阳还五汤药剂制备: 饮片先用清水浸泡30 min，第一煎加药材及5 倍体积双蒸水，煎煮60min，二煎5 倍体积双蒸水，煎煮60 min，两煎混匀，浓缩至含生药2 g·mL - 1，冷藏待用。
1. 3 试剂10% 水合氯醛( 扬州市奥鑫助剂厂) ，多聚甲醛( 长沙市锦华化工有限公司) ，TTC( 红四氮唑，Sigma 公司) 。
1. 4 仪器Bx51 光学显微镜及IPP5. 1 图像分析系统( 日本Olympus) ，FA 型电子天平( 上海台之衡电子衡器有限公司) ，自动双重纯水蒸馏器( 上海玻璃仪器一厂) ，Finesse 325 型石蜡切片机( 英国Shando) 。
2 方法
2. 1 分组与给药将大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组，每组63 只，每组动物又分3 个时间点，即分别于首次给药后7， 14， 21 d 处死，每个时间点21 只动物。补阳还五汤组动物于术后2 h后开始给药，给药剂量为5 g·kg - 1·d - 1，每日ig 1次。模型组和假手术组动物均给予等体积蒸馏水。
2. 2 模型制备与评价参照文献采用大脑中动脉线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型: 10% 水合氯醛( 3. 5 mL·kg - 1 ) ip 麻醉，取颈正中切口长约3cm，逐层分离，结扎颈外动脉，夹闭颈内动脉、再结扎颈总动脉，于颈总动脉充盈分叉部下方约4 mm处将一长为4 cm 直径为0. 26 mm 的尼龙鱼线插入颈内动脉，直到遇到轻微阻力为止，固定尼龙线，缝合切口。假手术组仅切开皮肤、分离左侧颈总动脉后随即缝合。术后将动物置于放有清洁垫料的饲养盒内，自由饮水、进食。动物清醒2 h 后参照Longa及Bederson的5 分制法进行神经功能评分，分值在1 ～ 3 分者入组。0 分: 无神经损伤症状; 1 分: 不能完全伸展对侧前爪; 2 分: 向对侧转圈; 3 分: 向对侧倾倒; 4 分: 不能自发行走，意识丧失。评分越高，神经功能缺损越严重，反之亦然。不纳入标准: 评分低于1 分; 蛛网膜下腔出血; HE 染色无脑缺血病理改变; 未到时间点死亡。死亡等不足动物时随机替补。
2. 3 指标检测
2. 3. 1 TTC 染色测脑梗死面积比每组每个时间点5 只大鼠， 10% 水合氯醛麻醉后，断头取大脑，置于- 20 ℃ 冷冻20 min 后，自额极每隔2 mm 切1片。第1 刀在脑前极与视交叉连线中点处; 第2 刀在视交叉部位; 第3 刀在漏斗柄部位; 第4 刀在漏斗柄与后叶尾极之间，共A，B，C，D，E 5 片。用2%的红四氮唑染色，37 ℃下避光30 min，正常组织呈深红色，而梗死组织则为白色。拍照后选最大缺血断面C 片梗死面积，运用Image-Pro Express 图像分析系统扫描计算，取梗死面积占C 片大脑总面积的百分比表示。为消除梗死侧大脑半球因脑水肿造成的误差，按Swanson 方法进行校正后计算C 片梗死面积百分比( IS) 。IS = ( S1 - Sr) /2S1 × 100%S1: C 片健侧总面积; Sr: C 片患侧非梗死区面积。
2. 3. 2 神经功能评分每组每个时间点10 只大鼠，于术后2 h 及动物处死前1 h 进行神经功能评分。
2. 3. 3 HE 染色观察海马、皮质组织病理学变化每组每个时间点6 只。同2. 3. 1 取大脑后4% 多聚甲醛固定24 h，梯度乙醇脱水，常规石蜡包埋，脑冠状连续切片( 片厚5 μm) ，取含海马切片贴于载玻片上，随后HE 染色，光镜下观察比较各组大鼠左侧海马、皮质组织细胞形态病理学改变。
2. 4 统计学分析
所有数据以珋x ± s 表示，应用SPSS 19. 0 统计软件对数据进行统计分析，组间比较用单因素方差分析，P < 0. 05 被认为具有统计学意义。
3 结果
3. 1 各组脑梗死面积比较通过TTC 染色，假手术组着色比较均匀，为深红色; 7， 14， 21 d 模型组与补阳还五汤组染色不均匀，局部梗死区为白色，梗死部位在缺血侧顶叶大脑皮质、海马周围。梗死面积分析显示，模型组和补阳还五汤组随时间点后延脑梗死面积均逐渐缩小( P < 0. 05) ; 且7， 14， 21 d 补阳还五汤组梗死面积明显小于同时相模型组，差异具有统计学意义( P < 0. 05) 。
3. 2 各组神经功能评分情况假手术组各时间点大鼠神经功能评分均为0 分; 补阳还五汤组各时间点神经功能评分均较同时相模型组低，差异具有统计学意义( P < 0. 05) 。
3. 3 各组海马、皮质组织细胞形态学变化
3. 3. 1 海马假手术组海马细胞形态正常，细胞轮廓清晰可见，细胞核染色均匀，细胞排列整齐，间质着色均匀。7，14，21 d 模型组海马神经细胞皱缩，出现细胞核固缩，核边集严重，细胞内有空泡，细胞形态由椭圆形变成梭形、三角形，细胞间间距增大，间质染色稀疏，有空洞。7， 14， 21 d 补阳还五汤组海马细胞空泡样细胞较模型组明显减少，细胞形态明显改善，细胞排列较模型组整齐。7，14 d 补阳还五汤组仍存在少量核深染及空泡样改变细胞，但21 d 补阳还五汤组海马细胞形态接近假手术组。
3. 3. 2 皮质假手术组皮质细胞形态正常，边缘清晰，排列整齐，形态完整，胞核着色均匀，细胞间质染色均匀。7，14，21 d 模型组缺血细胞呈空泡样坏死，细胞形态丧失，细胞间间隙增大，染色变浅，呈网状改变; 残存细胞其体积缩小、细胞核固缩深染、细胞边界不清。补阳还五汤组各时间点皮质细胞空泡样细胞较同时间相模型组明显减少，细胞形态明显改善，细胞排列整齐，神经细胞核较清晰，细胞间隙染色较均匀。
4 讨论
局灶性脑缺血又称缺血性脑卒中，是由于脑的血液供应障碍，导致脑组织缺血、缺氧，所致相应区域脑梗死性坏死，大量神经元丧失，而产生相应的神经功能缺损症状与体征，是脑血管疾病中最为常见的临床类型。目前西医治疗脑缺血的主要方法包括溶栓、抗凝、降纤、扩血管、高压氧、介入治疗等，还有尚处于动物实验阶段的基因治疗、神经干细胞移植等。这些治疗方法中除了超早期( 发病3 h 内)溶栓治疗有效率高达21% ～ 93%，其他疗法效果并不确定。而且溶栓治疗因其严格的时间窗，意味着只有不到5% 的病人有机会进行这一治疗。因此，缺血性脑中风的病人约80% 留下不同程度的后遗症——神经功能缺损。
典型的缺血性脑卒中在临床上可按照病程分为3 期。第1 期急性期，脑卒中后1 个月内; 第2 期恢复期，脑卒中后2 ～ 6 个月内; 第3 期后遗症期，脑卒中6 个月后。补阳还五汤主要用于脑缺血恢复期及后遗症期治疗，是治疗脑缺血后遗症的首选方，临床应用疗效显著。因此在动物实验中我们观察的时间点最长达到缺血后21 d，这相当于人脑缺血后遗症期。本实验研究中，神经功能评分结果表明补阳还五汤能促进脑缺血后大鼠神经功能恢复。其作用机制有学者认为与促血管生成、扩血管、抗凝、溶栓等改善脑缺血局部微循环，减轻脑水肿及氧自由基损伤，保护脑组织，从而促进神经功能恢复。本实验室及国内其他实验室研究表明补阳还五汤能促进缺血后脑内神经干细胞增殖、迁移、分化，可能也是其促进缺血后神经功能恢复机制之一。通过比较各组动物脑梗死面积比，结果显示补阳还五汤各时间点分别较同时间相模型组脑梗死面积明显缩小。可能的原因有: 其一，补阳还五汤在脑缺血急性期起脑保护作用，抑制了大量神经元死亡与凋亡导致梗死面积变小; 其二，补阳还五汤促进缺血后脑组织再生、修复、代偿，而导致梗死面积较相应的模型组缩小; 二者也可能兼而有之。另外，通过比较补阳还五汤组与模型组缺血后海马、皮质组织学改变，结果表明补阳还五汤能明显改善细胞形态与排列，促进脑缺血损伤后组织修复。
总之，本研究证实了补阳还五汤具有降低脑缺血神经功能评分、减小脑梗死面积、改善脑组织细胞形态与排列的脑保护作用，为该药临床治疗缺血性脑卒中提供了有力的实验依据。
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医学对大鼠研究论文
生物医学动物实验研究论文
1实验设计
在开展生物医学研究时，研究者通过正确地运用统计学知识，可直接影响研究的质量。统计学设计的任务在于对研究的部署、实施，直到研究结果的解释进行系统的安排，力争做到以最少的人力、物力获得可靠的结论和信息。其目的在于确定某种处理是否会表现出某种特定的效应。在实验设计时应遵循惟一差异原则，即在进行两组比较时，两者之间仅有因处理因素不同而引起的差异，而其他实验条件相关的非处理因素都应保持等同。然而，处理组与对照组在反应上表现出的差别并不一定意味着是处理的结果。另有两种引起差别的可能性，即偏倚和偶然性。偏倚是指系统性差别，它不是因组间在处理上的不同所引起。生物医学实验中统计学设计和分析的目标就是消除潜在的偏倚，减少偶然性[2]。
实验的偏倚和控制
偏倚是在研究中从设计到实验实施和结果分析的各环节存在一些人为的、有系统倾向的非随机误差，它不是由于抽样造成的，而是某种偏性使得实验结果偏离它的真值。从所选择的生物医学问题到研究方案的制订与实施、实验的完成过程、实验的分析与解释，乃至实验结果的发表，均可能存在各式各样的偏倚[2]。这种偏倚常常表现为系统误差。偏倚的大小取决于研究的方法和具体的实验条件。常见的偏倚主要有选择性偏倚、观察性偏倚和混杂性偏倚。必须认识实验过程的偏倚，从实验设计起直到整个研究过程结束均要加以控制。正确的实验设计可控制选择性的偏倚，事前人为控制和采取相应的措施可避免和减少观察性的偏倚。对于混杂性偏倚，可将重要的混杂因素在设计阶段进行分层随机设计，使混杂因素在组间分布均衡；在统计分析阶段将混杂因素作为分层因素或采用有协变量分析方法，以消除混杂因素的影响。只有有效地控制或消除偏倚，方可减少结果的假阳性或假阴性。
减少偶然性的潜在影响
偶然性因素的作用可以减少，但不能完全排除。因为即使是在精心实施的研究中，接受同样处理的动物，其反应也不可能完全一样。适当的统计分析可使实验人员评估出现假阳性的概率，即根本不存在处理效应的情况下观察到差异的概率。这种概率越小，实验者发现真实效应的可能性就越大。为了更有把握地检测出真实效应，有必要减少偶然性的作用，并通过实验设计确保能在“噪声”之上识别真正的“信号”。
实验设计的要素
要消除生物医学实验中潜在的偏倚，减少偶然性，就应对实验对象、处理因素和实验效应这三个实验设计要素，按照对照、重复、随机化和均衡四项原则进行周到的设计与控制[3]。实验对象实验中处理因素所作用的对象称为实验对象。不同性质的实验研究需要选取不同种类的实验对象，一个完整的实验设计中所需实验对象的总数称为样本含量。生物医学试验中考虑动物实验对象时应关注以下几个方面：①动物种属的选择：选择实验动物的种属与品系时，尤其需要注意其背景反应的水平。为了将反应“信号”水平最大化，常常意味着应避免选择那些背景反应水平极低的动物种属或品系，但如果采用过度反应的动物种属或品系也同样会出现问题。动物物种选择中的其他问题，无论是实际问题（寿命、体型、易得性、对动物学特征的了解情况）或是理论问题（生化、生理或解剖结构与人的相似性），都需要从专业的角度认真加以考虑和权衡。②动物的数量：虽然从统计设计角度考虑可得出某项实验所需的动物数（样本含量），但所得出的数值往往很大。因此，虽然样本含量估计是保证结论可靠性（精度和检验效能）的前提，但基于实验的可操作性及经济原则方面的考虑，应结合统计学的计算结果与以往的生物医学研究经验予以确定。③动物的体重与年龄：为确保实验对象的同质性，实验中所使用的动物体重与年龄应尽可能相近；动物体重的标准差不应超出平均值的10%；啮齿类等小动物年龄相差不应超出1周，大动物年龄相差不应超出1个月。④动物的分层：为了准确检测一种处理因素引起的差别，各处理组在可能影响实验结果的其他非处理因素方面应尽可能具有同质性。当存在动物亚系间的差别时，有两种方法可得到更为准确的结论。一是在结果分析阶段将亚系作为一个“分层变量”处理，包括对两个亚系的结果进行单独分析，然后将结果综合，得出处理效应的总结论；二是将亚系作为实验设计的“区组因素”，这种情况下可使对照组与处理组中每个亚系动物数量相等。除以上所讨论的“亚系”之外，其他的非处理因素，如性别、窝别、体重段等也可作为分层变量进行局部控制，并据此进行分层随机化分组。处理因素设计实验研究时，要明确研究中的处理因素和影响实验效应的非处理因素。研究者希望通过对研究设计进行有计划的安排，从而能科学地考察其效应大小的因素称为处理因素或实验因素；研究者往往忽略对评价实验因素作用大小有一定干扰的重要的非处理因素或非实验因素（如动物的窝别、体重等）；其他未加控制的许多因素的综合作用统称为实验误差。实验结果是处理因素和非处理因素共同作用而产生的实验效应，因此如何控制和排除非处理因素的干扰，正确显示处理的效应，是实验设计的基本任务。实验效应实验效应是处理因素作用于受试对象的反应和结果，是反映实验因素作用强弱的标志，它通过观察指标（统计学常将指标称为变量）来体现。如果指标选择不当，未能准确反映处理因素的作用，获得的研究结果就缺乏科学性，因此选择好观察指标是关系整个研究成败的重要环节。指标的观察应避免带有偏性或偏倚，要结合专业知识，尽可能多地选用客观性强的指标，在仪器和试剂允许的条件下，应尽可能多选用特异性强、灵敏度高、准确可靠的客观指标。对一些半客观（如尿液pH试纸读数值）或主观指标（行为测量、病理观察），一定要事先规定读取数值的严格标准，只有这样才能准确地分析实验结果，从而提高实验结果的可信度。
实验设计的原则
为了防止结果的偏倚，保证实验结果的准确性和最大化的表达，在进行生物医学实验设计时必须遵循统计学设计的对照、重复、随机化和均衡四个基本原则。生物医学实验中对照组的设置必须具备三个条件：①对等原则，即惟一差别原则，除处理因素外，对照组具备与实验组对等的非处理因素。在相互比较的各组间，除了给予的处理因素不同外，其他方面应与实验组具有一致性，如相同的实验单位来源（动物种属、体重等）和相同的实验条件、操作方式和喂养环境等。②同步原则，对照组与实验组设立之后，在整个研究进程中始终处于同一空间和同一时间。③专设原则，任何一个对照组都是为相应的实验组专门设立的。不得借用文献上的记载或以往结果或其他研究资料作为本研究之对照。
生物医学中常用的实验设计类型
如果需要在同一实验中同时评价几种不同的效应，实验者应该安排能区别各自效应差别的实验设计方法。生物医学中常用的实验设计有以下几项。完全随机设计完全随机设计是生物医学动物实验中最为常用的一种实验设计方法，它是一种单因素有k个水平（k≥2）组的实验设计。即实验设计可设置一个对照或多个剂量组的实验方案。本设计保证每个实验动物都有相同机会接受任何一种处理，而不受实验人员主观倾向的影响。本设计应用了重复和随机化两个原则，因此能使实验结果受非处理因素的影响基本一致，真实反映出实验的处理效应。随机区组设计随机化完全区组设计，简称随机区组设计，又称配伍组设计，是配对设计的扩展，它将几个条件相同的受试者划分在同一个区组或配伍组，然后再按随机的原则，将同一配伍组的受试者随机分配到各实验组。该设计方法的优点是每个区组内的k个实验单位有较好的同质性，比完全随机设计更容易察觉处理间的差别。这种方法须特别注意的是要求区组内实验单位数与处理数相同，实验结果中若有缺失值，统计分析将损失部分信息。拉丁方设计拉丁方设计从横行和直列两个方向进行双重局部控制，使得横行和直列两向皆成区组，是比随机区组设计多一个区组因素的设计。在拉丁方设计中，每一行或每一列都成为一个完全区组，而每一处理在每一行或每一列都只出现一次，也就是说，在拉丁方设计中，实验处理数=横行区组数=直列区组数=实验处理的重复数。析因设计析因实验设计又称全因子实验设计，属于多因素、多水平单效应的设计。它不仅可以检验每一因素各水平之间的效应差异，而且可以检验各因素之间的交互作用。交互作用是指一个因素不同水平间的效应差受另一因素的影响，包括协同交互作用和拮抗交互作用。析因实验主要用于分析交互作用，当因素及水平数过多时，所需的实验对象数、处理组数和实验次数大幅度增加，故一般采用较简单的析因实验。含有较多因素和水平的实验一般采用正交实验设计[5]。
2生物医学动物实验的描述统计学
生物医学实验资料的类型
生物医学实验对实验对象（动物）进行干预后测定的观测指标通常有以下类型：①连续性数据：测定结果表现为有数字大小和单位的数据，统计上称定量资料，如生理、生化指标，体重值，器官重量等。②分类数据：测定结果表现为按某属性划分的定性类别，统计上称为定性资料，具体又可以分为二值资料、多值名义资料和多值有序资料。如某反应为出现或不出现，死亡或未死亡，有畸形或无畸形；病理损害的严重程度（无、轻度、中度、重度）等。
统计描述指标
描述性统计学（或归纳统计学）是对样本观察/测量数据频率分布的定量研究，描述性统计的目的在于：①对测量值或观察值进行归纳浓缩，用统计量、统计图或统计表的形式表现；②估计总体分布的参数。资料的整理与探索对于某一测量指标，一般应从文献资料中了解其分布类型。如果没有判断概率分布的理论基础，应重复以大样本测定，绘制样本的频数分布图（理论上样本量要大于100），并经统计学检验拟合其分布。数据的描述统计量①连续性数据的频数分布：通过对样本资料编制频数分布表或做茎叶图，以确定资料分布的类型、频数分布的集中趋势和离散趋势、估计总体参数，也便于发现离群值。②中心位置的描述统计量：描述数据分布的集中趋势，常用指标为算术均数、中位数、众数、几何均数等。③离散程度的描述统计量：描述数据分布的离散趋势，常用指标为标准差和方差、极差和四分位数间距、变异系数和离散系数等。④统计学图表：统计图包括连续性数据分布的直方图、茎叶图，表示数据中心位置和离散程度的点杆图（做图时表示均数和标准差）和盒须图（做图时表示中位数、极差、四分位数间距），描述构成比数据资料的百分条图、饼图，描述经时变化趋势的线图，以及预测和检验分布类型的概率-概率图（P-P图）等[6]。统计表具有简单、明了、易于理解、便于比较的优点。编制统计表时原则上应当重点突出、层次分明、避免层次过多或结构混乱。一般的统计表应为三线表，表中只有横线，无竖线和斜线。统计表的标目应层次清楚，不宜过于复杂。
3生物医学动物实验的假设检验
生物医学动物实验中最常见的情况是给予不同受试物后进行组间比较，通过统计学中的假设检验，说明受试物的作用。假设检验时应注意以下问题。
检验方法的选用依据
资料的类型和变量的数目不同类型的资料（定量、定性）的组间比较应采用不同的统计检验方法。单变量、多变量的`统计检验方法也各不相同。实验设计类型应该根据实验设计的具体类型选择对应的统计检验方法，以便得到处理组效应的真实结论。检验方法的前提条件选用假设检验方法前，应了解所分析的数据资料是否满足相应检验方法的前提条件，如t检验和方差分析等参数检验方法要求数据满足正态性和方差齐性，2检验要求样本含量大于40且理论频数大于5。
正态性检验及拟合优度检验
统计学假设检验须判定样本的频数分布是否符合某一理论分布，如符合要求就可按此理论分布来进行统计学处理。对正态分布可采用正态性检验，其他分布可用拟合优度检验。通常可通过查阅文献，了解实验参数符合何种理论分布。
方差齐性检验
连续性数据未达到参数法统计分析前提的第二种原因即为方差不齐。一般而言，数值愈大，其固有的变异性也愈大。例如，若某组动物的平均反应值为100，其数值范围可能为80~120；而另一组动物的平均反应值为300，其数值范围可能会扩大至240~360。解决方差不齐的措施是进行数据转换。若数据的标准差与平均值成正比，在统计分析前宜将数据转换为对数值之后再进行分析，据此，不仅数据的变异度与平均值大小无关，同时还可确保其更符合正态分布。若数据变异度增加幅度与平均值的关系不太明显，采用平方根转换则更易使数据的变异度与平均值大小无关。某些数据经对数或平方根转换后可能仍存在方差不齐，此时宜采用非参数检验。
单侧检验与双侧检验
检验假设选择单侧检验或双侧检验，应事先根据专业知识做出选择。一般而言，若研究目的仅须了解是否存在组间差异、实验者无法预测组间变化的方向以及实验者希望获得正负两方面的结果时，应采用双侧检验。若事先可预测组间差异的变化方向，实验者仅对某一方面的重要性感兴趣，实验者仅希望了解与对照组差异或正或负一个方向，则应采用单侧检验。此外，剂量设计预试验中应采用双侧检验，正式试验在了解相关信息后可采用单侧检验。
多重比较及多重性问题
生物医学实验经常在处理组和对照组之间做多个变量的比较。即使不存在真正的实验效应，也有可能纯粹由于偶然性而有一个或多个变量在5%检验水平出现显著性差别。除了上述均数多重比较导致Ⅰ类错误概率增加的多重性问题之外，其他的多重性问题还包括多次的中期分析、关注多个结局、亚组间的多重比较。处理多重性问题的原则包括：①预先计划进行多重比较；②限制比较的次数；③多重比较时采用更严格的界值标准；④多重比较具有生物学方面的依据。
观察值或实验对象的独立性
许多统计检验方法要求比较的观察值或实验对象相互独立，如二项分布的率检验、t检验和方差分析等。但是，有的生物医学实验中观察单位并不独立。例如，生殖和发育研究中就存在窝效应：由于遗传因素、宫内的发育环境和药物的代谢环境相似，与异窝胎仔相比，同窝胎仔之间对毒性效应的反应概率趋于系统，即同窝内数据为聚集性数据，这就是一种常见的非独立数据。在统计学分析时，忽略数据的窝内相关性具有潜在的风险；因同窝母鼠所产k个胎仔的观察值存在共性，其所提供的信息不及k个独立的来自不同母鼠所产胎仔所提供的信息；窝内相关性愈大，其信息量愈少。聚集性数据的均数标准误小于独立的数据，因此，若基于观察值独立的统计分析方法，就会增加犯Ⅰ类错误的概率，即假阳性的风险增加，降低实验的有效性。
历史对照数据的应用
某些情况下，尤其是在发生率较低的情况下，单项研究可能提示处理可影响肿瘤发生率，但无法得出明确的结论。可能想到的分析办法之一是将处理组的数据与来自其他研究的对照组动物相比较。虽然历史对照数据具有重要意义，但值得强调的是，众多原因可导致不同研究之间的变异度大于研究之内的变异度。动物来源、饲料及饲养条件，研究期限，研究中的动物死亡率、读片的病理学家等均可能影响最终的肿瘤发生率。故此，忽视这些差异，将处理组的肿瘤发生率与合并的对照组发生率相比较，可能得出严重错误的结果，并进而明显夸大统计显著性水平。Tarone[4]曾对历史对照组的比率数据分析进行过综述。
假设检验的局限性
首先，假设检验中的P值并未提供有关处理诱发效应大小的直接信息。某一受试物可诱发一定量的、反应的增加，但增加的幅度是否具有统计显著性则取决于研究的规模和数据的变异性。在规模较小的研究中，有可能错失较大、重要的效应，尤其是在检测终点测量精度不高的情况下。相反，在规模较大的研究中，较小、非重要的效应则具有统计显著性。例如，D药与C药相比，降血压效应相差近30mmHg，但因为例数仅10例，假设检验未发现显著性差异（P=）；相反，B药与A药相比，降血压效应仅相差，但因为例数达500例，假设检验却发现存在显著性差异（P<）。由此可见，统计学显著性与效应大小无直接相关性。因此，愈来愈多的统计学家主张以处理组与对照组差异值的95%置信区间表述处理的效应。据此，若处理反应的增加值为10个单位（95%置信区间3~17单位），则该区间包含真实差异的几率为95%。若置信区间的下限大于零，则双侧检验的P值小于。其次，假设检验无法消除实验设计或实施不当所带来的影响。虽然前述的分层分析等有助于发现真实的差异，但若实验设计存在偏倚，或实验实施过程中存在偏差或失误，假设检验方法一般也于事无补。因此，在生物医学实验过程中应注重对实验设计或实施过程进行严格的质量控制和质量保证措施，强化GLP规范意识。其三，对统计学分析本身的质量控制和质量保证也是确保研究质量的重要环节。所用统计分析软件包应经过充分的认证，以确保分析结果的准确、可靠性。数据的录入、核对和分析结果的报告与归档，均应制订并严格执行相关的标准操作规程。综上所述，在动物实验研究的多个环节，统计学中的相关理论和方法都能够发挥重要作用。统计学不仅可以保证结果的科学性和可靠性，在很多情况下也可以极大地提高研究效率，节约研究成本。在这里还必须强调，除了实验后期的数据分析以外，在实验方案的制定阶段也需要统计学人员的早期介入，这样有助于避免实验设计出现大的偏差和漏洞，有利于研究目标的顺利实现。
（第一作者）1、Study of effects of different environmental temperature on Free Radical Metabolism during Exercise.第21届国际大学生运动会学术研讨会录用论文，2001,82、肥胖基因与运动.现代康复， 2001，21（5）：193、冷刺激和力竭运动对小鼠LPO及抗氧化能力影响，西安体育学院学报，2002，19（2）：525、间歇低氧训练对大鼠肾脏EPO基因表达的影响，沈阳体育学院学报，2003，（4）6、运动性内源自由基的产生及其基因表达的作用.沈阳体育学院学报, 2003，（3）：417、间歇低氧对线粒体钙转运及能量代谢的影响，中国临床康复，2003，7(27):37788、模拟高住低练对大鼠促红细胞生成素的影响，全国第七届大学生运动会论文集，2004，89、游泳训练对高脂膳食大鼠超氧化物歧化酶基因表达的作用. 广州体育学院学报，2004，24（2）10、常压模拟高住低练对大鼠心肌低氧诱导因子1α基因表达的影响，中国运动医学杂志，2004，（2）11、低氧预适应机制及其在运动中的应用，广州体育学院学报，2005.（1）12、高住低练对大鼠心肌线粒体活性氧的影响.中国运动医学杂志，2005，（6）13、间歇低氧训练对大鼠心肌线粒体脂质过氧化水平及抗氧化能力的影响.线粒体生理学术会议论文(中国科学院动物研究所主办)，2005，9 13、Effects on gene regulation by reactive oxygen species during Intermittent Hypoxic Training.线粒体生理学术会议论文(澳地利因斯布鲁克医学院主办), 2005，914、Effects of reactive oxygen species and antioxidant enzymes of ratduring Intermittent Hypoxic Training.第四届全国青年学术会议论文集.中国体育科学学会主办,2005,1115、低氧运动对大鼠促红细胞生成素的影响，广州体育学院学报，2006，（1）
鼠疫的研究现状论文
一种疫苗可以潜在地抵御两种最大的生物恐怖主义威胁——鼠疫和炭疽，一项早期研究表明。
研究人员在小鼠、大鼠和兔子身上测试了一种新的“双价”炭疽鼠疫疫苗，这些小鼠、大鼠和兔子后来同时暴露在鼠疫和炭疽中时间。他们发现，这种疫苗对这两种典型的致命疾病都提供了100%的保护。
“我们的研究提供了第一个概念性的证据数据，证明二价炭疽-鼠疫疫苗在生物错误攻击的情况下可能保护疫苗，”使用武器化炭疽或鼠疫细菌，研究人员在6月26日出版的《免疫学前沿》杂志上写道因此，作为国家应对生物恐怖主义威胁的准备工作的一部分，这种二价疫苗是一种很好的储备疫苗，”他们说。
然而，研究人员说，还需要对人类进行额外的研究，以确定疫苗的安全性和有效性。[27毁灭性传染病]
炭疽是由炭疽杆菌引起的，鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的。炭疽病和鼠疫都被认为是潜在的用于生物攻击的药物，在生物攻击中，微生物被故意释放以致病或杀人。此外，炭疽和鼠疫都是致命的，通常在3到6天内造成快速死亡，除非受害者在症状出现后24小时内接受抗生素，研究显示，
“故意释放这些生物体作为生物武器可能导致大量死亡、公众恐慌和社会混乱，研究人员说：
对付这种攻击的最好方法是在攻击前给人们接种疫苗，他们说。疫苗也可以在攻击后给予，以尽量减少进一步的伤亡和减少未来攻击的伤害。
然而，在美国，没有一种针对炭疽或鼠疫的疫苗被批准用于普通人群。（有一种炭疽疫苗只推荐给那些暴露于炭疽病风险增加的人，包括一些实验室工作人员和军事人员。）
在新的研究中，研究人员设计了一种含有三种蛋白质的疫苗——两种来自鼠疫菌，一种来自炭疽菌。这三种蛋白质结合在一起，形成一种单一的大蛋白质。研究人员的想法是，人体可以建立对这些蛋白质的免疫力，当暴露于这些蛋白质时，可以对它们发起成功的攻击。
研究人员用它们的疫苗免疫了8只小鼠，23天后，通过注射将这些小鼠暴露于炭疽病中，和肺鼠疫（最严重的鼠疫形式，可以通过空气传播）通过鼻喷雾剂。另一组对照鼠暴露但未接种。
接受疫苗的所有小鼠均存活，而未接种疫苗的所有小鼠均在暴露于两种细菌后两天内死亡，研究发现。
大鼠实验结果相似，由于所有接种过疫苗的大鼠都能在鼠疫和炭疽感染下存活下来，所有未接种过疫苗的动物都会死于这种疾病，研究人员还用兔子测试了他们的疫苗，因为兔子是一种更好的动物模型，可以用可吸入的“雾化”炭疽进行实验。接种疫苗的10只兔子均在炭疽气溶胶中存活，而未接种疫苗的所有兔子均在炭疽暴露后2-4天内死亡。
这项研究首次表明疫苗能完全保护动物免受炭疽和鼠疫的同时暴露，研究人员说，
如果新疫苗在未来的临床试验中成功，它“可以简化储存炭疽和鼠疫生物防御疫苗的工作，
鼠疫疫苗1、美国亚利桑那州立大学生物学教授于2006年致力于研究烟草鼠疫疫苗，一旦成功表示将继续展开蔬果疫苗以预防鼠疫。2、中国西北农林科技大学研究人员于2006年正在开展鼠疫亚单位疫苗和活载体疫苗的研究，认为亚单位疫苗融合蛋白的保护效果较好，有望进一步研究。
旅鼠之谜的研究成果小论文
当旅鼠的数量实在太多，而天敌数量总是有限，无论怎样地暴露自己都收效甚微。因此它们会显示出一种非常强烈的迁移意识，聚集在一起，渐渐地形成大群，开始时似乎没有什么方向和目标，到处乱窜，就像是出发之前的乱忙，正在准备似的。但是后来，不知道是谁下了命令，也不知谁带头，它们却忽然朝着同一个方向，浩浩荡荡地出发了。往往是白天休整进食，晚上摸黑前进，沿途不断有老鼠加入，而队伍会愈来愈大，常常达数百万只，逢山过山，遇水涉水，勇往直前，前赴后继，沿着一条笔直的路线奋勇前进，决不绕道，更不停止，一直奔到大海，仍然毫无惧色，纷纷地跳将下去，直到被汹涌澎湃的波涛所吞没，全军覆没为止。这就是旅鼠的第三大奥秘。
旅鼠为什么会集体自杀，科学家们虽然进行了大量的观察和研究，却仍然众说纷纭，莫衷一是，提不出一个令人信服的解释来。有人认为，旅鼠的集体自杀，可能与它们的高度繁殖能力有关。旅鼠喜独居，好争吵，当其种群数量太高时，它们会变得异常兴奋和烦躁不安，这时，它们便会在雪下洞穴中吱吱乱叫，东奔西跑，打架闹事。因此有人认为，由于其繁殖力过强，旅鼠得不到充足的食物和生存空间，只好奔走它乡。值得一提的是，旅鼠的分布极广，除北欧以外，在美洲西北部、俄罗斯南部草原、一直到蒙古一带均有其分布，但只有北欧挪威的旅鼠有周期性的集体跳海自杀行为。因此，有的生物学家进一步解释说，在数万年前，挪威海和北海比现在要窄得多，那时，旅鼠完全可以游到大海彼岸，长此以往，世代相传，形成了一种遗传本能。然而，由于地壳的运动，日前的挪威海和北海已今非昔比，比过去要宽得多，但旅鼠的遗传本能仍然在起作用，因此，旅鼠照样迁移，最后被溺死海中，演出了一幕幕旅鼠集体自杀的悲剧。 但是，这一学说存在严重的不足。因为旅鼠是啮齿类动物，它几乎以北极所有的植物为食，而且即使达到每公顷250只的密度也是地广鼠稀，所以旅鼠的迁移并非因为得不到足够的食物和生存空间。更加有说服力的是，旅鼠在迁移过程中即使遇到食物丰富，地域宽广的地区也决不停留。况且，旅鼠也迁入巴伦支海和沿北冰洋北上，若按上述观点，许多年前巴伦支海北部理应有陆地，否则，旅鼠又为何北迁呢？对此，前苏联的科学家又提出了新的解释，在10000年以前，地球正处在寒冷的冰期，北冰洋的洋面上结成了厚厚的一层冰，风和飞鸟分别把大量的沙土和植物的种子带到冰面，因此，每逢夏季，这里仍是草木青青，旅鼠完全可能在此生存。只是由于后来气候变化，才导致原来冰块的消失，而如今向北跳入巴伦支海的旅鼠，正是为了寻找昔日的居住地。这一解释虽然有道理，但缺乏充足的证据，因此仍不尽如人意。 另外一种学说则认为，由于种群数量的增加，导致旅鼠活动过度（紧张不安，东奔西跑）和社群压力增加，结果旅鼠的肾上腺增大，神经高度紧张，显得焦躁不安起来，而且运动的欲望十分强烈，于是便开始分散和迁移，有些企图横渡江河湖泊和大海，尽管旅鼠善于游泳，但终因体力不支而被溺死，有些刚跑到食物稀少的边缘地区，忍饥挨饿，旺盛的性欲随之下降，于是种群数量开始大规模降低。不过，此学说也有一定的缺陷，因为高密度的后果往往不会马上在当代就出现，而是在下一代才受影响。 总之，关于旅鼠集体自杀的问题，有外部环境条件的影响，也有旅鼠自身生理上、行为上，甚至遗传上的因素，面对如此复杂的问题，还有许多研究工作要做，只有这样，才能逐步揭开旅鼠集体自杀之谜。 另外，研究旅鼠生命周期的科学家还发现，在其数量急剧增加的时期，旅鼠体内的化学过程和内分泌系统同时也发生变化。有人认为，这些变化可能正是生物体内控制其种群数量的开关，当其数量达到一定程度时，就会促使该种群大量的集体死亡。但旅鼠到底是集体自杀，还是在迁移过程中误入歧途，坠入大海而溺死，至今仍然看法不一，这一直是生物界中一大难解之谜。
好棒的回答!!不过,是抄袭的似乎......不确定 回答者：梦幻雅儿 - 魔法学徒 一级 5-30 21:41
好棒的回答!!不过,是抄袭的似乎......不确定
胡桃夹子老鼠王的论文研究
胡桃夹子的故事
1. 圣诞节即将来临。玛丽的爸爸、妈妈和教父多萝西给玛丽的兄弟们送了礼物。玛丽爱上了其中一个可爱的小人儿。爸爸告诉玛丽，这个可爱的小男人的工作是为别人咬核桃。它的牙齿非常锋利，可以咬硬核桃。
2. 父亲让玛丽保护那个咬核桃的小个子男人。玛丽高兴地把这个小男人放在客厅的橱柜里作为圣诞礼物。午夜时分，玛丽仍然舍不得离开这个恶棍。
3.不久之后，一件非常奇怪的事情发生了。有许多老鼠在玛丽的前面。它们都排列得很整齐。突然，地上开了一个洞，一个七头鼠王从洞里爬了出来。老鼠们组装好后，来到玻璃柜前。与此同时，咬核桃的小个子男人动了起来。他走上前去，组织大家和老鼠打起来。
4. 不幸的是，由于力量的悬殊，咬核桃的小个子男子处于劣势。在生死关头，玛丽匆忙脱下左脚的鞋子，向老鼠群扔去。老鼠王被击中了。老鼠群被打败了，四散而逃。那个咬核桃的小个子男人和他的下属都得救了。
5. 原来，老鼠王和吃核桃的小个子之间有一段宿怨。教父多萝西给玛丽讲了一个关于这个的故事。
6. 在一个王国里，住着一位喜欢热闹的国王。有一天，他想举办一个盛大的香肠派对。他让擅长做香肠的女王做香肠。
7. 在制作过程中，老鼠皇后想尝尝培根做香肠馅，好心的皇后同意了。鼠后和她的亲戚们吃了一顿丰盛的晚餐，几乎把肉吃光了。最后，女王只能在每根香肠里放一点肉。
8. 国王知道后，非常生气。他决定惩罚老鼠。老鼠受了重伤。为了报复国王，老鼠皇后用魔法把国王美丽的女儿变丑了。
9. 国王命令技术员doxeme和天文学家想办法让公主恢复美貌。后来，公主恢复了美貌，但踩过老鼠皇后的狐仙的侄子也变丑了。
10. 玛丽终于明白，那个咬核桃的小个子男人是教父多萝西的侄子。他成了小娃娃王国的王子，和老鼠皇后的儿子战斗。
11. 玛丽想帮助那个咬核桃的小个子男人。她帮他弄到了一把剑。咬核桃的小人用这把剑杀死了老鼠王，并送给玛丽七枚王冠。他还邀请玛丽参观小娃娃王国。
12. 当她醒来时，玛丽正在她的床上睡觉。她的父亲、母亲和教父都认为她是在做梦，不相信她的冒险经历，但玛丽仍然把这些美妙的感觉保存在心里。后来，多萝西的教父把他的侄子带到玛丽面前。几年后，人们看到他们幸福地生活在一起。
《胡桃夹子》是芭蕾舞剧也是我喜欢的故事中的一个~我讲给你...想起来多少 讲多少吧~女孩的名字叫加纳。加纳喜欢新奇的事物 她的梦想是环游世界 但是她有一个管教很严厉的爷爷 她的爷爷绝对不允许她这么做。一次宴会上 加纳喜欢的阿姨伊丽莎白参加 伊丽莎白一直在环游世界 伊丽莎白阿姨的经历让加纳羡慕不已。伊丽莎白阿姨送给加纳一个礼物 礼物就是胡桃夹子。伊丽莎白阿姨说 胡桃夹子外表可能不漂亮 可是里面有一颗王子的心。加纳很喜欢胡桃夹子。她睡着了 手臂边放着胡桃夹子...奇幻旅程就这么拉开帷幕...当古欧式时钟敲响12点 老鼠王带着他的老鼠士兵来到加纳的房间 胡桃夹子动了动 开始与老鼠王搏斗 这一切就像个梦 加纳不敢相信自己的眼睛 当老鼠王的权杖指向胡桃夹子的时候 加纳拿起花瓶去阻止老鼠王 老鼠王将权杖指向了加纳 加纳变成了和胡桃夹子一般大的小人 只有糖果公主才能破解老鼠王的魔法 加纳开始了和胡桃夹子一起寻找糖果公主的旅程 原来胡桃夹子没被老鼠王施魔法前 是艾利王子 他不是一个好王子 他的权利被老鼠王抢走 使他的子民经受苦难 最后胡桃夹子和加纳终于到了传说中糖果公主的所在 可是却遇见老鼠王 老鼠王有权杖 胡桃夹子并不是他的对手 当老鼠王用权杖指向加纳说着咒语“变小变小变小”的时候 胡桃夹子用剑挡住了权杖 权杖的光线反射 咒语施在了老鼠王身上 老鼠王变的更小了 不堪一击的老鼠王逃跑了 加纳扶起胡桃夹子并亲吻了胡桃夹子的脸 奇迹发生了 胡桃夹子变成了艾利王子 并且所有被老鼠王施魔法的小人都变回原来的样子 原来加纳 就是糖果公主。
影片《胡桃夹子和四个王国》改编自童话作品《胡桃夹子与老鼠王》，讲述了女孩克拉拉在圣诞夜得到了胡桃夹子的玩具，后来她率领玩具兵与邪恶七头鼠王作战的故事。以下是我为大家整理的关于这部影片的观后感，欢迎大家阅读！
总体来说，《胡桃夹子和四个王国》这部电影，如果是100分的总分来衡量，可以打90分，值得推荐。原本以为奇幻片剧情会偏低龄化，但事实并非如此，富有想象力的故事情节、唯美精致的画面、跌宕反转的剧情都让《胡桃夹子和四个王国》适合全年龄阶层的人观看。
故事发生在平安夜，一个幸福美满的家庭，因为女主人的去世蒙上了灰蒙蒙的色彩，父亲把母亲临终前准备的圣诞节礼物递给孩子们，女主角克拉拉得到是一个没有钥匙的子弹锁和妈妈留的一张卡片：你想要的都在里面。面对父亲的冷漠，和没有钥匙的子弹锁，都让克拉拉很迷茫和丧气。最终，她决定去找教父寻找打开子弹锁的方法。
克拉拉根据教父的引导，来到另一个世界，这里的人称克拉拉公主，对她毕恭毕敬。原来，克拉拉和母亲一样，喜欢研究玩具和机器，并且母亲发明了把玩具变成富有情感的真实人类的方法，在这个奇幻世界里，所有人都尊称母亲为女王，克拉拉终于明白母亲的用意：她想要的都在这里——原来母亲是给自己留了一个童话王国呀。
来到童话王国的克拉拉并没有忘记自己初衷：找到打开子弹锁的钥匙。而克拉拉发现这把钥匙涉及到王国的另一个秘密，最终，克拉拉解开了全部的秘密，并让王国回到运转的正确轨道上。
不得不说电影女主角克拉拉的扮演者选角很厉害，把聪明和不合群的气质展露无遗，而且演员脸上的小雀斑，后期和化妆也没有特意处理，看起来更加符合人物设定。
而且电影中，王国的摄政王为了给克拉拉讲清楚王国的由来和秘密，排了一出芭蕾舞，有那么几分钟，观众感觉自己在看舞台剧，而且里面的钢琴音乐是朗朗演奏的噢。
总而言之，这部电影，不论是自己一个人去看，还是情侣约会去看，或者作为家庭观影，都是适宜的，没有血腥和绝对的坏人，雅俗共赏。
《胡桃夹子和四个王国》是迪士尼的一部动画片，与其说它是一部动画片不如说一部动画片成人化影片，这一次迪士尼再次联手了皮克斯为大家带来这部视觉盛宴。
“动画片成人化”的电影尝试，《胡桃夹子和四个王国》不是第一个，可以说最早的尝试是一部名为美女与野兽的电影。
《胡桃夹子和四个王国》的故事改编自《胡桃夹子与老鼠王》的这部著名的童话故事。童话故事一直都是传递美好，这个故事也一样。
克拉拉一直在寻找一把钥匙——这把与众不同的钥匙将可以开启已故母亲装有无价之宝的盒子。在教父德罗塞尔梅耶举办的一次节日聚会上，一根金线指引着她找到了这把梦寐以求的钥匙，却在瞬间消失进入一个陌生而神秘的平行世界。在平行世界里，克拉拉结识了士兵菲利普、一群老鼠、以及分别掌管雪花王国、鲜花王国、糖果王国的三位国王。克拉拉和菲利普必须勇敢地接受第四位国王——暴君姜母的考验，才能够找回钥匙、并将和平重新带回这个摇摇欲坠的平行世界。
在看完影片之后，这部影片出现两极分化的评价。
认为它好的说这样说：迪士尼的电影从没让我失望过，午休时间出来看包场电影，真的是可以把自己置身于童话世界中去享受那一刻的美好，回归于现实生活中，我们每个人都是自己的主人公。在复杂的社会环境里，我们常常想要逃避，活在自己的小世界里，可是既然存活于社会之中，就没办法真正意义上的逃离，于是我们必须勇敢必须坚强，相信自己能够披荆斩棘度过一重又一重的“难关”。偶尔我们甚至还要感谢这些“难关”，因为是它们让我们成长，让我们变得不再懦弱和胆小，让我们更加地勇敢和坚强，去面对未来的一切可能，愿我们迷茫过后都能找到自己的位置。
认为它不好的人只有一句话：幼稚并且感情插入好牵强。
对于电影出现不一样的评价，其实这很正常，这是一部“动画片成人化”我们在前文中已经提到了，所以这样的一部电影并不会像其他的剧情片那样有嚼头，所以这也是无可厚非的，对比于不好的评价，我更加认同这是一部我们可以置身于童话中的影片，成人的社会那么复杂，我们为什么不能逃避一会，享受那份美好呢，回过头来，战胜一切呢。
好的故事好的作品有时候不仅仅是因为剧情入圣，而是能带给我们一种力量让我们在平凡的现实生活中披荆斩棘，砥砺前行。
华美精致的服装并无法赋予人物以深度，艳丽唯美的基色也并不能构建剧情的惊艳，根据经典改编的《胡桃夹子和四个王国》虽有着一副好看的皮囊，但这一次的迪士尼却没能在故事上给人带来多少新意，剧情的.羸弱老套使电影最终显得既空洞又无趣。
迪士尼真人电影其实一直没有像其动画电影那样部部都能给人带来惊喜，这其中虽然不乏《沉睡魔咒》这样的新颖之作，但不少根据童话改编的电影作品也都反响平平，而对于《胡桃夹子和四个王国》来说,电影并没有去思考总结迪士尼真人童话电影之前已经出现的种种问题，仍旧只是用华丽甜腻的风格来吸引观众，但对于成人来说，纵然能被电影华丽的外表所暂时迷惑，却无从真正沉浸于这样的童话。
《胡桃夹子和四个王国》的电影改编其实先天就存在一个严重的问题，那就是其并没有去填补原著中很多过本就存在的逻辑缺陷，例如电影作为一部童话却非要给自己套上一层伪科学的外衣，而以其自身所建立的科学去看待这个世界观却会发现很多东西都完全无法自圆其说，更不谈电影中那不胜枚举的逻辑诟病，这些问题使电影不但拿不出任何新鲜的的东西来吸引观众，即便是对比几年前的《爱丽丝梦游仙境》也是倍感逊色的。
作为一部童话电影，或许很多人认为不应该去苛求故事的逻辑性，但《胡桃夹子和四个王国》的诟病除了逻辑之外，还在于电影自身想象力的贫瘠，以及节奏的失控。纵观全片这部电影几乎找不到一个让人能记忆犹新的电影，整个主线故事的呈现给人最为直观的感受就是力不从心，无论是主人公的情感，还是反派的角色设定，都给人一种按部就班带入不了情感的感觉，而华丽的特效堆砌只是使电影显得花里胡哨，这种华丽在电影过半时其实已让人视觉疲软了。
作为一个距今时隔数百年的童话，纵然电影有着一个成长的内核，但靠注水所拉长时间，特效遮蔽问题的做法，其实根本无从在光影的世界里上演一场将腐朽化为神奇的奇迹。